鸡源魏氏梭菌的耐药性分析及抗菌肽抑菌特点的检测

摘要

魏氏梭菌是一种重要的人畜共患病病原菌，能引起人和动物创伤感染及食物中毒。鸡坏死性肠炎是由A型或C型魏氏梭菌引起的以鸡小肠黏膜出血和坏死为主要特征的一种细菌性急性传染病。随着规模化养殖场大量抗生素的使用，魏氏梭菌多重耐药性不断出现，已经成为公共卫生安全关注的热点。为了掌握全国规模化养鸡场中鸡源魏氏梭菌的耐药状况，本研究对全国不同地区分离到的魏氏梭菌进行耐药性实验，检测不同地区魏氏梭菌耐药性的差异，旨在为鸡坏死性肠炎的诊断与合理治疗提供重要条件和可靠依据，同时通过与某公司的合作对抗菌肽进行魏氏梭菌抑菌和杀菌特点的检测，为药物的研发提供重要的数据。
　　 本研究通过魏氏梭菌的分离鉴定，对从全国不同地区分离得到的40株魏氏梭菌进行耐药性分析。参照NCCLS推荐的标准，用K-B法检测了分离菌对16种抗菌药物的敏感试验检测表明，青霉素类药物中有2株对青霉素G耐药(5％，2/40);四环素类中耐药菌株有24株，均为对四环素耐药(60％，24/40);对大环内酯类中有21株耐药，其中对替米考星、红霉素、泰乐菌素耐药率分别为5％(2/40)，12.5％(5/40)，35％(14/40);对林可胺类中的林可霉素耐药菌株有23(57.5％，23/40);磺胺类中无敏感菌株，耐药菌株中耐甲氧嘧啶24株(60％，24/40)，耐复方新诺明38株(95％，38/40);酰胺醇类、喹诺酮类和磷霉素中均无耐药菌株。魏氏梭菌对四环素类，大环内酯类和林可胺类已广泛存在耐药性。同时魏氏梭菌存在多重耐药性，在所有养鸡场中耐1种药物的菌株仅占2.5％(1/40)，而2-5重耐药的菌株分别为12.5％(5/40)、50％(20/40)、22.5％(9/40)、10％(4/40)、2.5％(1/40)，3重耐药菌占比例最高。
　　 在全国范围内的养殖场中，广泛存在鸡魏氏梭菌感染。药敏试验表明魏氏梭菌对一部分药物已经不再敏感，具有广泛耐药性以及多重耐药性，对长期临床应用的大部分药物已表现出不同程度的耐药，如青霉素G、林可霉素等。
　　 通过使用精提纯、粗提纯、抗菌肽原液三种抗菌肽样品对产气荚膜梭菌的最小抑菌及杀菌浓度进行分析，了解不同抗菌肽样品对产气荚膜梭菌的抑菌及杀菌效果特点。最终通过多次试验及对照实验得出抗菌肽三种样品（按次序依次是精提纯产品，粗提纯产品，抗菌肽原液）最小抑菌浓度分别是1850μg/ml，3000μg/ml，800μg/ml，最小杀菌浓度分别为2000μg/ml，8500μg/ml，1600μg/ml。

目录

声明

符号说明

摘要

1 引言

1．1 魏氏梭菌简介

1．2 病原学

1．3 流行病学

1．4 鸡魏氏梭茵病

1．5 魏氏梭菌的检测方法

1．5．1．脉冲凝胶电泳分型(PFGE)

1．5．2 随机引物PCR

1．5．3 扩增片段长度多态性(AFLP)

1．5．4 基因组短重复序列标记

1．6 魏氏梭菌的分型研究进展

1．7 魏氏梭菌的耐药现状

1．7．1 青霉素类

1．7．2 大环内酯类

1．7．3 林可胺类

1．7．4 四环素类

1．7．5 酰胺醇类

1．7．6 磺胺类

1．7．7 喹诺酮类药

1．8 抗生素滥用危害

1．9 抗菌肽简介

1．10 本研究的目的和意义

2 材料与方法

2．1 材料

2．1．1 菌株

2．1．2 主要试剂、培养基

2．1．3 主要仪器设备

2．1．4 抗生素种类

2．2 实验方法

2．2．1 主要试剂的配置

2．2．2 引物设计

2．2．3 样品的采集

2．2．4 样品的分离培养与初步鉴定

2．2．5 DNA模板的制备

2．2．6 紫外光吸收检测

2．2．7 琼脂糖凝胶电泳

2．2．8 药敏实验

2．2．9 抗菌肽最小抑菌浓度的检测

3．结果分析

3．1 细菌的分离鉴定

3．1．1 血琼脂培养基培养

3．1．2 革兰氏染色镜检

3．2 PCR结果

3．3 药敏试验结果

3．4 抗菌肽抑菌杀菌特点结果

4 讨论

5 结论

参考文献

致谢

硕士期间发表的论文

附录