高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒感染妊娠中、后期胎儿后致病性的研究

摘要

高致病性猪繁殖与呼吸综合征（Highly pathogenicporcine reproductiveand respiratorysyndrome，HP-PRRS）于2006年在我国南方一些省份暴发，与经典的PRRS相比，HP-PRRS以高发病率(50％-100％)、高死亡率(20％-100％)、高热为主要特征，能够引起更严重的妊娠母猪繁殖障碍和呼吸道疾病。
　　为了对HP-PRRSV引起妊娠母猪繁殖障碍机制进行研究，本实验分别对妊娠60d和妊娠90d的母猪感染HP-PRRSV TA-12，在不同的攻毒后7、14、21d剖杀母猪，采集胎儿的组织器官，制作石蜡切片，以观察其组织病理学变化并且采用免疫组织化学(IHC)的方法对组织病原的定位进行检测，同时比较实时荧光定量RT-PCR对病原分布情况的检测结果。并且对攻毒后的细胞免疫应答因子的水平进行了动态变化检测。
　　不同时间剖杀的不同妊娠时期的胎儿剖检病变主要在妊娠90d攻毒组，肝脏、肾脏、心脏、淋巴结有不同程度的出血点、充血和淤血，甚至在脑膜下也有出血点，肺脏局部实变，小叶间隔水肿。镜下观察结果发现胎儿肺脏呈间质性肺炎;大脑的噬神经现象;肠道充血;脾脏的出血、淋巴细胞变性坏死。IHC检测结果显示HP-PRRSV主要分布在胎儿的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、气管、下颌腺、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、胸腺，在7dpi检测出具有阳性信号的器官最多，在14、21dpi检出率减少;实时荧光定量RT-PCR结果显示攻毒后第7天除了脾脏、胸腺、肺脏、空肠和直肠外，妊娠90d攻毒组病毒mRNA转录水平略高于妊娠60d攻毒组，14dpi时除了肺脏、空肠、直肠、心脏病毒mRNA转录水平妊娠60d攻毒组略高于妊娠90d攻毒组。21dpi除了气管、回肠、直肠、下颌腺和脐带外，妊娠60d攻毒组病毒mRNA转录水平略高于妊娠90d攻毒组。不同时期胎儿体内的细胞因子的检测通过比较分析得出:在妊娠60d攻毒组，肺脏、脾脏、下颌淋巴结、胎盘中的IL-2、IL-6、IL-8和IFN-γ在7、14、21dpi均呈不同程度的下降;胎盘、脾脏（除了14dpi）中的TNF-α表达水平升高，而在肺脏、下颌淋巴结中均下降;在妊娠90d攻毒组，肺脏、脾脏、下颌淋巴结、胎盘中IL-2、IL-6、IFN-γ从7dpi到21dpi均呈不同程度的下降;IL-8除了7dpi胎盘和21dpi脾脏升高外，其他器官均下降;脾脏、胎盘（21dpi未检）中的TNF-α在7、14、21dpi时呈上升趋势，其他器官均下降。
　　本实验表明，HP-PRRSV感染主要引起胎儿肺脏、大脑、肠道以及脾脏等的病理学变化。IHC和RT-PCR结果显示妊娠中期和妊娠后期HP-PRRSV对胎儿的感染能力无明显区别。IL-2和IFN-γ是细胞免疫的的细胞因子，妊娠中期和妊娠后期其表达水平均下降，说明HP-PRRSV感染可导致仔猪的细胞免疫水平降低。而使IL-8和TNF-α表达水平升高，在一定程度上增加了机体的炎症反应，也体现机体对病毒的抵抗能力。HP-PPRSV感染不仅引起母猪的免疫机能紊乱，而且使不同妊娠时间的胎儿的免疫机能发生紊乱，可能是引起繁殖障碍的一个重要原因。以上研究初步确定HP-PRRSV感染特点以及病原和胎儿之间的相互作用，为进一步研究HP-PRRSV引起妊娠母猪繁殖障碍机制奠定基础。