意大利蜜蜂工蜂幼虫和成蜂饲粮中亚油酸适宜添加水平的研究

摘要

亚油酸(LA)是多不饱和脂肪酸(PUFA)之一，是蜜蜂生长发育所必需的脂肪酸，具有调控脂类代谢、调控基因表达和脂肪细胞的分化、维持细胞膜的功能和提高机体免疫能力等重要生理作用。目前关于意大利蜜蜂饲粮中亚油酸的适宜添加水平还没有明确的参考标准，本试验以意大利蜜蜂为研究对象，以亚油酸为试验材料，通过测定不同亚油酸水平的饲粮对意大利蜜蜂生长发育和生理生化指标的影响，探讨意大利蜜蜂幼虫期和成蜂期饲粮中适宜的亚油酸添加水平。该研究结果为制定蜜蜂饲养标准、配制蜜蜂饲粮、人工饲养幼虫提供重要的理论依据和生产指导。
　　一、意蜂幼虫饲粮中亚油酸适宜添加水平的研究。选取1152只1日龄的工蜂幼虫，随机分为6组，每组192只幼虫，对照饲喂基础饲粮(BLD)，试验组分别饲喂添加0.02％、0.04％、0.06％、0.08％和0.10％亚油酸的饲粮，将幼虫置于48孔细胞培养板中饲养，培养板放入培养箱中(35℃、90％R.H.)，试验期间每天饲喂1次，每孔每次饲喂150μl，试验期7d。在将幼虫转移到化蛹板的时候统计化蛹率和化蛹时体重，第5、6、7天时采集样品，测定虫体蛋白质浓度、过氧化物酶增殖物激活受体(PPAR)和脂肪代谢相关酶活性以及相关基因mRNA相对表达量。结果表明:1）与对照组相比，饲粮添加0.10％亚油酸显著降低了化蛹率(P＜0.05)，其他组与对照组无显著差异。2）与对照组相比，饲粮添加0.04％亚油酸显著提高了5日龄虫体蛋白质浓度(P＜0.05);饲粮中添加0.10％亚油酸显著降低了7日龄蛹蛋白质浓度(P＜0.05）。3）与对照组相比，饲粮添加0.02％亚油酸对6日龄虫体的PPARα活性有显著的抑制作用(P＜0.05)，添加0.08％的亚油酸则显著提高了6日龄虫体PPARα和PPARγ活性。4）与对照组相比，饲粮添加0.04％和0.08％亚油酸显著提高了6日龄虫体脂肪酸合成酶(FAS)活性(P＜0.05);添加0.08％亚油酸显著提高了5日龄虫体乙酰辅酶A羧化酶(ACC)浓度(P＜0.05)，添加0.06％和0.10％亚油酸显著提高了6日龄虫体ACC浓度(P＜0.05)，添加低浓度亚油酸显著提高了MDH和CYP450的浓度，当亚油酸添加量过高时则会降低MDH和CYP450的浓度，对CPT和G6PD活性无显著影响。5）饲料中添加本试验设定范围的亚油酸对幼虫FAS、ACC和G6PD基因mRNA相对表达量无显著影响（P＞0.05）。综合化蛹率和虫体蛋白质浓度2个指标的拟合曲线结果，得出意大利蜜蜂工蜂幼虫饲粮中亚油酸的适宜添加水平为0.024％～0.037％
　　二、意蜂成蜂饲粮中亚油酸适宜添加水平的研究。选取1200只初生蜂，随机分为6组，每组200只，对照饲喂基础饲粮，试验组分别饲喂添加0.35％、0.7％、1.05％、1.4％和1.75％亚油酸的饲粮，蜂盒放入33℃，50％R.H.的恒温恒湿培养箱内。第7、14天取样，每组取5个重复，用于测定蜂体蛋白浓度、T-AOC、FAS活性和ACC浓度。试验期间每天饲喂一次，计算每天采食量，将死亡蜜蜂取出，用于统计平均日采食量和存活率。结果表明:1）亚油酸在一定浓度范围内提高了成蜂存活率，饲粮添加1.05％亚油酸时存活率最高;各组平均日采食量无显著差异(P＞0.05)。2）饲粮中亚油酸添加水平显著影响蜂体蛋白浓度(P＜0.05)，蜂体蛋白浓度整体呈先上升后下降的趋势，亚油酸添加水平在0％～1.4％范围内时，蜂体蛋白浓度逐渐升高，亚油酸添加水平提高到1.75％时，蜂体蛋白浓度开始下降。3）饲粮添加亚油酸对14日龄成蜂T-AOC有显著影响(P＜0.05)，蜂体T-AOC呈逐渐上升的趋势，说明亚油酸浓度与T-AOC成正相关。4）总的来说，随着饲粮中亚油酸浓度的升高，FAS活性和ACC浓度呈先上升后下降的趋势。与对照组相比，饲粮添加0.7％亚油酸显著提高了蜂体脂肪酸合成酶(FAS)活性(P＜0.05);添加0.35％～1.4％亚油酸显著提高了蜂体乙酰辅酶A羧化酶(ACC)浓度(P＜0.05)。综合存活率、蛋白浓度、FAS活性和ACC浓度四个指标的拟合曲线结果，得出意大利蜜蜂成蜂饲粮中亚油酸的适宜添加水平为0.89％～1.07％。

目录

声明

符号说明

摘要

1 前言

1．1 昆虫中的脂类

1．2 脂类对昆虫的营养生理作用

1．2．1 为昆虫生命活动提供能量

1．2．2 维持昆虫正常发育和繁殖

1．2．3 提高昆虫抗菌能力

1．2．4 可作为信息素的组成成分

1．2．5 影响昆虫的寿命

1．3 脂类的代谢

1．3．1 脂类的消化吸收

1．3．2 脂类的中间代谢

1．4 多不饱和脂肪酸的营养作用

1．4．1 调控脂类代谢

1．4．2 调控基因表达和脂肪细胞的分化

1．4．3 作为细胞膜磷脂的重要成分，维持细胞膜的功能

1．4．4 提高机体免疫能力

1．5 蜜蜂脂类营养需要的研究进展

1．6 本研究的目的和意义

2 材料与方法

2．1 意蜂幼虫饲粮中亚油酸适宜添加水平的研究

2．1．1 试验动物

2．1．2 试验设计

2．1．3 幼虫饲粮组成

2．1．4 饲养管理

2．1．5 测定指标及测定方法

2．1．6 数据分析

2．2 意蜂成蜂饲粮中亚油酸适宜添加水平的研究

2．2．1 试验动物

2．2．2 试验设计

2．2．3 成蜂饲粮组成

2．2．4 饲养管理

2．2．5 测定指标及测定方法

2．2．6 数据分析

3 结果与分析

3．1 饲粮亚油酸水平对意蜂幼虫的影响

3．1．1 饲粮亚油酸水平对意蜂幼虫化蛹时体重和化蛹率的影响

3．1．2 饲粮亚油酸水平对意蜂幼虫虫体蛋白浓度的影响

3．1．3 饲粮亚油酸水平对意蜂幼虫抗氧化能力的影响

3．1．4 饲粮亚油酸水平对意蜂幼虫脂肪代谢的影响

3．1．5 饲粮亚油酸水平对意蜂幼虫脂肪代谢相关基因相对表达量的影响

3．2 饲粮亚油酸水平对意蜂成蜂的影响

3．2．1 饲粮亚油酸水平对意蜂成蜂平均日采食量和存活率的影响

3．2．2 饲粮亚油酸水平对意蜂成蜂蛋白浓度的影响

3．2．3 饲粮亚油酸水平对意蜂成蜂T-AOC的影响

3．2．4 饲粮亚油酸水平对意蜂成蜂FAS活性和ACC浓度的影响

4 讨论

4．1 饲粮亚油酸水平不影响意蜂幼虫化蛹时体重

4．2 饲粮亚油酸水平影响意蜂幼虫化蛹率

4．3 饲粮亚油酸水平不影响意蜂成蜂平均日采食量

4．4 饲粮亚油酸水平影响意蜂成蜂存活率

4．5 饲粮亚油酸水平影响意蜂蛋白浓度

4．6 饲粮亚油酸水平不影响意蜂抗氧化能力

4．7 饲粮亚油酸水平影响意蜂PPARs和脂肪代谢相关酶活性或浓度

4．8 饲粮亚油酸水平不影响意蜂脂肪代谢相关基因表达量

5 总体结论、创新点及后续工作展望

5．1 总体结论

5．2 创新点

5．3 后续工作展望

参考文献

致谢

攻读学位期间发表论文情况

项目资助