黄芪甲苷对大鼠脑出血后水通道蛋白4的表达及脑水肿的作用研究

摘要

目的：通过研究黄芪甲苷（Astragaloside IV，ASG）对大鼠脑出血（Intracerebral hemorrhage，ICH）后出血灶周围组织水通道蛋白4（Aquaporin-4，AQP4）的表达及脑水肿（brain edema,BE）程度的影响，来探讨ASG调节脑出血后细胞水肿的机制。
　　方法：将健康的雄性 SD大鼠建立大鼠脑出血模型，随机分为对照组、脑出血模型组及 ASG治疗组，对各组大鼠分别在脑出血后1、2、3、5、7d进行以下研究：1、依据 Bederson评分标准对各实验组大鼠神经性为进行神经功能评分；2、应用尼氏染色技术和HE染色法对大鼠脑出血灶周围的细胞进行形态学观察；3、采用干湿重法测量各组大鼠脑组织的含水量；4、运用免疫组织化学技术检测各组大鼠出血灶周围 AQP4表达阳性的细胞数，并应用免疫荧光技术检测出血灶周围星形胶质细胞的变化趋势及AQP4的表达情况；5、应用Western blot法检测各组出血灶周围脑组织中AQP4的表达。
　　结果：1、神经行为学评分：脑出血模型组以及 ASG组大鼠在各时间点均出现肢体偏瘫等症状，对照组大鼠各时间点均正常；ASG组与出血模型组大鼠在相同间点进行比较，1d时间点时并无显著差异（P＞0.05），3d、7d时间点时 ASG组大鼠的神经行为学评分均有显著降低，该差异有统计学意义（P＜0.05）。2、出血灶周围细胞的形态学观察：尼氏染色和HE染色结果均显示，对照组细胞形态、结构均正常，脑出血模型组出血灶周围组织严重破坏，细胞结构紊乱，神经元破碎、数目降低，细胞核碎裂，该表现在血模型组3d时间点时最为明显；3d、7d时间点时 ASG组细胞的形态学变化较相应的模型组有所改善。3、干湿重法检测结果：模型组大鼠的脑组织水肿程度在1d、2d以及3d时间点处均显著高于对照组（P＜0.01），而在5d、7d时间点处两组差异不显著（P＞0.05）；模型组1、2、3d时间点大鼠的脑组织含水量均明显高于5、7d时间点（均有 P＜0.05）；2d时间点与1d时间点间亦存在显著差异（P＜0.05）；治疗组大鼠脑水肿程度仅在2d时间点处显著高于对照组（P＜0.05），在2d、3d时间点处均显著低于模型组（P＜0.05）。4、免疫组化检测结果：模型组与 ASG组大鼠的AQP4阳性细胞计数在各时间点均显著高于对照组（P＜0.05），高峰出现于2d时间点。ASG组大鼠 AQP4阳性细胞计数在除1d外其他时间点均显著低于模型组（P＜0.05）。5、免疫荧光检测结果：AQP4在星形胶质细胞中表达；ASG组在1、3、5d时间点星形胶质细胞数量较出血模型组增高（P＜0.01）；ASG组除1d时间点 AQP4阳性细胞与模型组无明显差异（P＞0.05）外，3、5d时间点时均低于模型组，且具有统计学意义（P＜0.01）。6、Western blot结果：正常对照组中有少量AQP4蛋白表达，对照组中AQP4蛋白表达量在各时间点处均显著低于模型组与 ASG组（P＜0.05）；而模型组各组组间比较可以看出，2d时间点 AQP4表达明显高于其他时间点（P＜0.01）；ASG组 AQP4的表达量除1d时间点外其他各时间点均低于模型组，且具有统计学意义（P＜0.05）。
　　结论：1、脑出血后水肿期大鼠脑内 AQP4显著升高，并且在2d时达到高峰；2、脑血灶周围细胞内AQP4的表达量与细胞水肿程度之间存在显著相关性；3、ASG能够明显降低脑出血后大鼠脑内 AQP4的表达，并可减轻出血灶周围脑组织的水肿程度；4、ASG治疗脑水肿的作用机制可能是通过减少细胞内AQP4的水平来实现的。

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前言

材料与方法

1 实验动物筛选

2 实验动物分组以及用药剂量

3 主要试剂和设备

4 主要溶液的配制

5 大鼠脑出血模型(自体血)的建立

6 大鼠神经行为学评分测定

7 实验动物取材

8 分光光度法

9 形态学检测

10 免疫组化染色

11 Western blot法检测

12 免疫荧光法检测

13 统计学分析

结果

1 黄芪甲苷对大鼠脑出血后神经行为学的评分结果

2 脑出血后大鼠脑内含水量的检测干湿重法测定结果

3 免疫组织化学检测各组大鼠各时间点脑组织出血灶周围AQP4表达

4 Western blot检测各组大鼠脑出血灶周围脑组织AQP4蛋白表达

5 脑组织水肿程度与AQP4表达量的关系

6 免疫荧光检测各组大鼠脑出血灶周围脑组织星形胶质细胞及AQP4蛋白的表达

讨论

1 脑出血的发病与治疗现状

2 AQP4与脑水肿

3 大鼠脑出血模型的建立（自体血模型-二次注血法）

4 黄芪类药物的药理作用及研究进展

5 黄芪甲苷干预下脑出血大鼠神经功能的改变

6 黄芪甲苷对大鼠脑出血后脑水肿程度及脑内AQP4表达的影响

7 小结与展望

结论

附图

参考文献

综述: 水通道蛋白4(AQP4)对脑出血后水肿作用的研究进展

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文