清脉饮及拆方含药血清对TNF-α损伤的人血管内皮细胞及相关因子的影响

摘要

目的：研究淸脉饮及其拆方的含药血清对肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的人脐静脉内皮细胞（EAhy926）损伤的血管内皮细胞及相关因子的影响。
　　方法：制备实验设计的含药血清；将培养的EAhy926细胞，随机分为空白对照组、TNF-a损伤组、10％低剂清法组、10%中剂清法组、10%高剂清法组、活血组、全方组、软坚组等。各中药含药血清及清法不同浓度含药血清与TNF-α共同处理血管内皮细胞24h后，光镜下观察EAhy926细胞的形态变化，电镜下观察EAhy926细胞的细胞器改变；免疫组化法检测CRP、IL-6、ET-1及VEGF光学显微镜下观察它们在细胞中它们的表达情况；硝酸还原法检测NO，通过显色深浅测定其浓度的高低；Real-time PCR检测NF-ΚB基因的表达；
　　结果:①光镜下细胞大体形态变化清脉饮含药血清与TNF-α共同处理的细胞，各组损伤均较少，细胞数量多，活血组细胞数量相对较少；②电镜下细胞结构的改变：清脉饮含药血清与 TNF-α共同处理的细胞其损害较单纯 TNF-α损伤组的细胞小，其中以中剂清法组、软坚组、西药组，对细胞器的损伤最少，细胞的超微结构与正常对照组比较没有明显差异；③下调NO浓度，CRP、IL-6、ET-1及VEGF的表达量上，组间比较，10%中清组较其他浓度在下调内皮素具有良好效果最好；下调NO浓度以及CRP、IL-6、VEGF的表达，西药组的效果最佳，10%中清组效果优于软坚组、活血组。清法各浓度组之间比较，10%中清组较其他浓度效果最好；④下调NF-ΚB基因的表达上，组间比较，10%中清组、全方组、西药组在控制NF-ΚB的表达上具有优势，西药组的效果最佳，10%中清组、全方组、10%低清组、10%高清组、软坚组、活血组依次次之。10%中清组与全方组相当且低于活血组（P＜0.05），说明10%中清组效果优于活血组。清法各浓度组之间比较，10%中清组较其他浓度在下调NF-ΚB基因的表达具有效果最好。
　　结论:①清脉饮及其拆方含药血清可能通过拮抗TNF-α对体外培养的动脉内皮细胞的损伤作用，保持其结构完整性；以起到防止或减轻动脉内皮细胞损伤的作用；西药组、清法方含药血清效果最佳。②清脉饮及其拆方含药血清可能通过下调受损内皮细胞内NO浓度，CRP、ET-1、IL-6、VEGF的表达量以阻止内皮细胞进一步损伤，其中以10%清法组效果较佳，优于活血组；③清脉饮及其拆方含药血清可能通过阻断TNF-α激活的NF-κB经典通路，调控NF-κB基因表达从而减轻对血管内皮的炎症反应。④从实验的各个角度中观察，在清脉饮及其拆方中，10%中清组效果最佳，优于活血组。

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