MEHP、MBP联合染毒致小鼠睾丸间质细胞氧化应激损伤以及枸杞多糖对其保护作用的研究

摘要

目的：探讨邻苯二甲酸单(2-乙基)己酯（mono(2-ethylhexyl)phthalate，MEHP和邻苯二甲酸单丁酯(monobutyl phthalate，MBP)联合染毒致体外培养的小鼠睾丸间质细胞（TM3）氧化损伤及枸杞多糖对细胞的保护作用。
　　方法：1、将小鼠睾丸间质细胞（TM3）在含10％胎牛血清浓度的DMEM高糖培养基条件下体外培养，用浓度为0（对照组）、1、10、100、500、1000umol/L不同浓度梯度的MEHP和MBP作用于小鼠睾丸间质细胞48h。2、以MTT法测定细胞活力以及MEHP和MBP对细胞的毒性作用。3、比色法测定细胞内超氧化物歧化酶（SOD）酶活力情况；用试剂盒检测细胞内丙二醛（MDA）含量。4、用试剂盒检测细胞线粒体内8-OHdG含量。5、用试剂盒检测细胞Caspase-3酶活力。6、Western blot检测细胞裂解液中Bax，Bcl-2的表达水平。
　　结果：1、MEHP和MBP联合染毒对TM3细胞的增殖抑制存在交互作用，使细胞存活率明显降低，表现为协同作用。2、MEHP和MBP单剂量染毒，随着染毒浓度的增加，细胞内的SOD水平明显降低；MEHP和MBP联合染毒组呈现协同作用。3、MEHP和MBP单剂量染毒，随着染毒浓度的增加，细胞内的MDA水平明显升高；MEHP和MBP联合染毒组呈现协同作用。4、荧光电镜结果显示，联合染毒组可见大部分细胞死亡，剩余细胞肿胀堆积、变暗，间隙更大。5、MEHP和MBP单剂量染毒，随着染毒浓度的增加，细胞内线粒体8-OHdG含量明显升高；MEHP和MBP联合染毒组呈现协同作用。6、MEHP和MBP联合染毒致细胞内Caspase-3活力增加，提示染毒诱导TM3细胞凋亡。7、细胞内蛋白水平Bax随着单剂量MEHP、MBP染毒浓度增加而增加；细胞内蛋白水平Bcl-2随着单剂量MEHP、MBP染毒浓度增加而降低。联合染毒组细胞与对照组比较，细胞内Bax蛋白水平增加，Bcl-2蛋白水平降低，显示细胞内促细胞凋亡的存在。而枸杞多糖保护组细胞凋亡与联合染毒组相比，细胞内Bax蛋白水平降低，Bcl-2蛋白水平增加。
　　结论：MEHP和MBP联合染毒对小鼠睾丸间质细胞的增殖有抑制作用，造成小鼠睾丸间质细胞发生氧化应激反应,主要表现为脂质过氧化水平的增高,同时降低细胞抗氧化水平，促凋亡蛋白表达水平升高，抑凋亡蛋白表达水平降低，诱导细胞凋亡。枸杞多糖对细胞有一定的抗氧化应激保护作用。

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前言

材料和方法

1.1 实验材料

1.2 实验方法

1.3 统计学方法

结果

2.1 MEHP染毒对 TM3细胞活力的影响

2.2 MBP染毒对TM3细胞活力的影响

2.3 MEHP和MBP联合染毒对 TM3细胞活力的影响

2.4 MEHP和MBP联合染毒对TM3细胞超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）的影响

2.5 不同浓度染毒后小鼠睾丸间质细胞结构变化

2.6 MEHP和MBP联合染毒对细胞线粒体内8-OHdG含量的影响

2.7 MEHP和MBP联合染毒对细胞Caspase-3活力值的影响

2.8 Western blot 检测显示MEHP和MBP联合染毒致细胞内Bax、Bcl-2表达改变。

讨论

3.1 MEHP、MBP染毒可影响细胞增值抑制。

3.2 MEHP、MBP染毒可影响细胞氧化应激指标的改变。

3.3 不同浓度染毒后小鼠睾丸间质细胞结构的变化。

3.4 MEHP、MBP染毒对细胞线粒体8-OHdG含量的影响。

3.5 MEHP、MBP染毒对细胞Caspase-3活力值的影响。

3.6 MEHP、MBP染毒可诱导细胞内Bax、Bcl-2蛋白水平的变化。

3.6 枸杞多糖对细胞的保护作用

结论

参考文献

综述:邻苯二甲酸酯的研究近况

致谢

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