鲁西南地区畜禽大肠杆菌mcr-1耐药基因携带情况调查

摘要

2016-2017年，鲁西南地区鸡肉出口前多次检出多黏菌素，并引起了我国监管部门和进口国的关注。经监管调查发现，多黏菌素用于预防控制大肠杆菌、沙门氏菌等革兰氏阴性菌效果明显，作为饲料药物添加剂和预防用药大量使用，而近年来，世界多个国家和地区出现了多黏菌素耐药的报道，其中耐多黏菌素基因mcr-1逐渐成为国内外研究热点，因此，调查了解鲁西南地区多黏菌素耐药基因mcr-1流行情况既是该地区出口企业提高用药效率的需要也是排除食品安全监管工作隐患的需要。 本研究结合监管工作实际，以鲁西南地区出口鸡肉多黏菌素检出为线索，对多黏菌素目标菌生物学特性、细菌的耐药现状、常见耐药机制和mcr-1基因介导的耐药性特点进行了综述。为了解鲁西南地区mcr-1流行情况，从2018年4月-2019年3月，对来自济宁、枣庄、临沂、菏泽四地市的待宰的鸡和猪取样肛棉拭子183份，采集后的样品经过增菌和鉴别培养基培养后，对其进行革兰氏染色和生化鉴定，将鉴定为大肠杆菌的菌株使用甘油保存，然后采用聚合酶链反应技术和琼脂糖凝胶电泳技术对经生化鉴定后的大肠杆菌进行mcr-1的检测。之后对mcr-1阳性大肠杆菌来源的养殖场的空气、水、鸡粪和卫生间进行采样，然后分离大肠杆菌再进行mcr-1的检测以跟踪调查其环境中mcr-1的存在情况。还采用K-B纸片扩散法分别对mcr-1阳性和阴性大肠杆菌进行了多黏菌素等10种药物的药敏试验，分析了mcr-1阳性和阴性大肠杆菌对多黏菌素的敏感和耐药情况。 本试验通过对大肠杆菌的分离鉴定后共获得156株非重复大肠杆菌，其耐药基因mcr-1的检测结果表明，共检出mcr-1基因43份，mcr-1总体携带率达到25.9%，其中鸡源性大肠杆菌携带率33.7%，猪源性菌携带率8.9%。对两家mcr-1阳性养殖场跟踪取样分离获得13株大肠杆菌，检出mcr-1耐药基因6份，分别来自鸡粪、鸡饮用水和鸡舍内空气。经药敏比对试验发现mcr-1阳性和阴性大肠杆菌对多黏菌素敏感的比例分别为35%和70%。 通过试验了解了鲁西南地区畜禽来源大肠杆菌mcr-1的携带比例，对于出口企业提高针对性用药，提高经济效益有直接作用，同时为我部门制定多黏菌素残留控制措施、提高监管水平提供了理论和数据支持。还探索了对mcr-1阳性养殖场环境进行跟踪取样的有效方法，为我部门和出口企业开展养殖场环境监测提供了方法参考和经验。

目录

声明

符号说明

1前言

1.1 大肠杆菌生物学特性概述

1.1.1 形态特征

1.1.2 培养特征

1.1.3 生化特征

1.1.4 理化特征

1.2 大肠杆菌的危害性

1.3 大肠杆菌的耐药性

1.3.1 耐药性概述

1.3.2耐药性的产生

1.3.3大肠杆菌耐药机制

1.4 mcr-1基因介导的耐药性

1.4.1 mcr-1的发现

1.4.2 mcr-1来源

1.4.3 mcr-1结构

1.4.4 mcr-1与黏菌素耐药性的关系

1.4.5 mcr-1介导的黏菌素耐药机制和传播特点

1.5 mcr-1介导的耐药性预防控制措施

1.6 本研究的目的和意义

2材料与方法

2.1试验材料

2.1.1细菌培养材料

2.1.2 PCR检测材料

2.1.3 其他材料

2.2 主要仪器设备

2.3 方法

2.3.1 样品采集及处理

2.3.2细菌分离纯化

2.3.3革兰氏染色镜检

2.3.4生化鉴定

2.3.5细菌的保存

2.3.6耐药基因的检测

2.3.7 药敏比对实验

3结果与分析

3.1鉴定结果

3.1.1大肠杆菌培养特性

3.1.2大肠杆菌形态鉴定

3.1.3分离菌生化特性

3.2大肠杆菌的分离结果

3.3 mcr-1耐药基因调查结果

3.3.1 mcr-1扩增和测序结果

3.3.2 mcr-1阳性养殖场调查结果

3.3.3药敏试验结果

4讨论

4.1调查结果讨论

4.1.1大肠杆菌mcr-1基因的携带率

4.1.2药敏试验比对结果

4.1.3 在养殖场环境中检出mcr-1

4.1.4 mcr-1的稳定性

4.2创新点

5 结论

参考文献

致谢

攻读学位期间发表论文情况