野靛碱对小鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用及对NR2B-ERK/CREB信号通路影响的研究

摘要

目的：观察野靛碱（Cytisine，CYT）对小鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用以及探讨其存在的作用机制。
　　方法：1观察野靛碱碱对小鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用①采用Longa法构建小鼠大脑左侧中动脉阻塞局灶性脑缺血损伤模型；②采用Bederson评分法评价野靛碱对小鼠神经功能缺陷的影响；③采用TTC染色观察野靛碱对小鼠脑梗死率的影响；④采用干湿重法测定野靛碱对小鼠局灶性脑缺血损伤侧脑组织含水量的影响；⑤采用HE染色观察野靛碱对小鼠缺血侧脑组织病理结构变化的影响；⑥采用TUNEL法检测野靛碱对小鼠脑缺血侧组织细胞凋亡率的影响；⑦采用透射电镜检观察野靛碱对小鼠脑缺血侧脑组织细胞超微结构变化的影响。
　　2探讨野靛碱对小鼠局灶性脑缺血损伤可能存在的保护作用机制:
　　①采用分光光度检测野靛碱对小鼠局灶性脑缺血损伤侧脑组织CAT、SOD、GSH-Px酶活性及MDA含量的影响；②采用免疫荧光观察野靛碱对小鼠脑缺血侧组织NR2B、p-ERK、p-CREB免疫阳性细胞表达的影响；③采用RT-PCR检测野靛碱对小鼠脑缺血侧组织NR2B、ERK、CREB mRNA表达的影响；④采用Western blot检测野靛碱对小鼠脑缺血侧组织NR2B、t-ERK、p-ERK、t-CREB、p-CREB蛋白表达的影响。
　　结果：1.野靛碱对小鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用
　　与模型组比较，脑缺血后CYT（0.5、1 mg/kg）组和尼莫地平组显著降低小鼠神经功能缺陷评分（P<0.01）；CYT（0.5、1 mg/kg）组和尼莫地平组与模型组比较，可显著减小脑缺血梗死率（P<0.01）；与模型组比较，CYT（0.5、1mg/kg）组和尼莫地平组可明显减轻小鼠脑缺血侧组织中细胞结构病理性损伤；CYT（0.25、0.5、1mg/kg）组和尼莫地平组与模型组比较，可显著降低小鼠脑缺血侧组织中海马 CA1区和皮层区细胞凋亡率（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，CYT（mg/kg）组和尼莫地平组可显著减轻小鼠脑缺血侧组织中细胞超微结构结构病理性变化。
　　2.野靛碱对小鼠局灶性脑缺血损伤可能的保护作用机制
　　与模型组比较，CYT（01 mg/kg）组和尼莫地平组可显著减少脑缺血侧组织脑含水量（P<0.05）；与模型组比较，CYT（0.5、1mg/kg）组和尼莫地平组可显著减少小鼠脑缺血侧组织中MDA含量（P<0.05，P<0.01）；CYT（0.5、1mg/kg）组和尼莫地平组与模型组比较，可显著增强小鼠脑缺血侧组织中SOD和CAT活性（P<0.05，
　　P<0.01）；与模型组比较，CYT（0.25、0.5、1mg/kg）组和尼莫地平组显著增强小鼠脑缺血侧脑组织中GSH-Px活性（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，CYT（1mg/kg）、尼莫地平组显著降低皮层、海马CA1区细胞NR2B免疫阳性表达（P<0.01）；CYT
　　（1mg/kg）、尼莫地平组与模型组比较可显著增强皮层区、海马区细胞p-ERK免疫阳性表达（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，CYT（1mg/kg）、尼莫地平组显著增强皮层区、海马区细胞p-CREB免疫阳性表达（P<0.01）；CYT（1 mg/kg）组和尼莫地平组与模型组比较可显著抑制小鼠脑缺血损伤侧脑组织NR2B蛋白表达（P<0.01），显著增强p-ERK、 p-CREB蛋白表达（P<0.05，P<0.01），对t-ERK、 t-CREB蛋白表达无明显影响；与模型组比较，CYT（1 mg/kg）组和尼莫地平组显著抑制小鼠脑缺血侧脑组织NR2B mRNA表达,显著促进ERK表达（P<0.01）；CYT（1 mg/kg）组提高CREB mRNA表达但无统计学意义。
　　结论：
　　1. CYT对小鼠局灶性脑缺血损伤具有良好的保护作用。
　　2. CYT对小鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用可能与调节NR2B-ERK/CREB信号通路有关。

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前言

材料与方法

1. 野靛碱对小鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用

2. 研究野靛碱对ICR雄性成年小鼠局灶性脑缺血损伤可能的神经保护作用机制

结果

1 CYT对小鼠局灶性脑缺血损伤的神经保护作用

2 CYT对小鼠局灶性脑缺血损伤可能的神经保护作用机制

讨论

1.野靛碱对ICR雄性小鼠局灶性脑缺血损伤的神经保护作用

2. CYT对小鼠局灶性脑缺血损伤可能的保护作用机制

结论

图与照片

参考文献

文献综述: 小鼠局灶性脑缺血损伤机制研究进展

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