促卵泡刺激素通过调控颗粒细胞分泌干细胞因子促进卵泡发育成熟的研究

摘要

目的：
　　研究成熟卵泡与未成熟卵泡中促卵泡刺激素受体（FSHR）及干细胞因子（SCF）的表达情况，探究颗粒细胞中FSHR及SCF的表达与卵泡成熟是否有关；研究不同浓度的重组促卵泡刺激素（rFSH）对体外培养的人卵巢颗粒细胞的SCF信使RNA（mRNA）及蛋白表达是否有影响；探讨人卵巢颗粒细胞中促卵泡刺激素调节干细胞因子分泌的机制。
　　方法：
　　实验性研究。收集行卵胞浆内单精子显微注射技术（ICSI）患者（均为输卵管因素或男方因素）的颗粒细胞，以成熟卵泡及未成熟卵泡来源分组，分别检测两组颗粒细胞中FSHR及SCF的表达情况；对行体外受精-胚胎移植技术（IVF-ET）后的卵泡液来源的颗粒细胞进行不同浓度的rFSH（果纳芬；10IU/L，25 IU/L，50 IU/L，100 IU/L，200IU/L）干预培养，与空白对照组（正常培养）一同检测FSHR及SCF的表达情况；用含有rFSH、环磷酸腺苷激动剂（cAMP）及PKA抑制剂（H-89）的培养基培养IVF卵泡液来源的颗粒细胞，将细胞分为6组：空白对照组，rFSH单独培养组，H-89单独培养组，cAMP单独培养组，H-89联合cAMP培养组，H-89联合rFSH培养组。用Real-time PCR，细胞免疫荧光技术及Western blot检测人颗粒细胞中FSHR及SCF的蛋白和mRNA水平。
　　结果：
　　未成熟卵泡来源的颗粒细胞中的FSHR及SCF的表达比成熟卵泡来源颗粒细胞中较低；用不同剂量的rFSH干预培养颗粒细胞后，FSHR及SCF mRNA及蛋白呈现浓度依赖性升高而后降低；FSH可能通过cAMP/PKA途径影响颗粒细胞中SCF的mRNA及蛋白分泌。
　　结论：
　　在人卵巢颗粒细胞中，FSH可能通过上调FSHR表达，激活cAMP/PKA信号传导通路，从而增加SCF分泌进一步促进卵泡及卵母细胞的发育成熟。

目录

声明

缩略词表

前言

材料与方法

1.研究对象

2.实验试剂及仪器

3. 实验方法

4统计学分析

结果

1.观察人卵泡内颗粒细胞的体外培养及鉴定

2.成熟卵泡和未成熟卵泡颗粒细胞中SCF的分泌表达测定

3.不同浓度的rFSH干预培养颗粒细胞后，其FSHR及SCF分泌表达测定。

4.FSH通过cAMP/PKA途径对颗粒细胞SCF mRNA及蛋白分泌的影响

讨论

结论

参考文献

综述:人卵泡发育及其局部调控

致谢

攻读学位期间发表的学术论文

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