龙胆苦苷对匹罗卡品诱发癫痫小鼠的抗癫痫作用及其对NR2B/CaMKⅡ/CREB信号通路的影响

摘要

目的：
　　癫痫是神经元自发反复放电的一种常见大脑疾病。目前癫痫的治疗仍以药物治疗为主，但仍有约1/3的患者对药物治疗不敏感，故迫切需要寻找治疗癫痫的新疗法。前期研究发现龙胆苦苷对N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体具有调节作用。在本研究中，我们观察龙胆苦苷（Gentiopicroside,Gent)对匹罗卡品（Pilocarpine,Pilo）诱发癫痫发作小鼠的抗癫痫和神经保护作用，并探讨NR2B/CaMKII/CREB信号通路对其抗癫痫及神经保护作用的影响。
　　方法：
　　预先给予小鼠腹腔注射Gent（200mg/kg、400mg/kg、800mg/kg），30分钟后腹腔注射Pilo（280mg/kg）并密切观察小鼠行为学变化。给予Pilo后72小时进行分子生物学及组织病理学检测。
　　1.观察Gent对Pilo诱导癫痫小鼠的抗癫痫及神经保护作用
　　①行为学方法：给予Pilo后，观察Gent对小鼠惊厥潜伏期、进入癫痫持续状态的时间、惊厥率及存活率的影响。
　　②脑电测量：给予Pilo后，观察Gent对小鼠皮层脑电图的变化，并对脑电图的波幅及总功率进行分析。
　　③组织病理学方法：给予Pilo后72小时，对小鼠大脑行Nissl染色和Fluoro jade B（FJB）染色，观察Gent对小鼠海马组织病理结构变化的影响。
　　2.探讨NR2B/CaMKII/CREB信号通路在Gent对Pilo诱导癫痫小鼠的抗癫痫及神经保护作用的关系
　　①运用Western blot方法检测Gent对小鼠海马组织中Bax、Bcl-2、Caspase-3、NR2B、钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶（CaMKII）、p-CaMKII、cAMP反应元件结合蛋白（CREB）与p-CREB蛋白含量的影响，分析海马中Bax、Bcl-2、Caspase-3、NR2B、CaMKII和CREB对Gent镇痛作用的影响。
　　②运用q-PCR方法检测Gent对小鼠海马组织中NR2B mRNA、CaMKII mRNA、CREB mR含量的影响。
　　结果：
　　1.龙胆苦苷对Pilo诱发癫痫小鼠的抗癫痫及神经保护作用
　　龙胆苦苷各给药组(400、800 mg/kg)与模型组比较，可显著延长癫痫潜伏期和进入癫痫持续状态时间(p<0.05，p<0.01)；龙胆苦苷(400、800 mg/kg)组与模型组比较，可显著降低进入癫痫持续状态的比率和死亡率；与模型组比较，龙胆苦苷(400、800 mg/kg)组能显著减少脑电图的平均波幅及总功率(p<0.05，p<0.01)；与模型组比较，龙胆苦苷(400、800 mg/kg)组可以减轻癫痫引起海马CA1、CA2区的病理性损伤。
　　2.龙胆苦苷对Pilo诱发癫痫小鼠的抗癫痫及神经保护作用与NR2B/CaMKII/CREB信号通路的关系
　　龙胆苦苷组(800mg/kg)与模型组相比较，可降低p-CaMKII、p-CREB、NR2B、Bax、Caspase-3蛋白含量在海马组织的表达（p<0.05）,并能明显升高 Bcl-2蛋白的表达(p<0.05)；对比模型组，龙胆苦苷(800mg/kg)能抑制海马组织中NR2B mRNA、CaMKII mRNA、CREB mRNA的表达（p<0.05）。
　　结论：
　　Gent对Pilo诱发癫痫小鼠具有明显的抗癫痫及神经保护作用，其作用机制可能与Gent调节海马组织中NR2B/CaMKII/CREB信号通路有关。

目录

声明

中英文缩略词表

前言

材料与方法

1 观察 Gent 对 Pilo诱发癫痫小鼠的抗癫痫作用

2 探讨Gent 对Pilo诱发癫痫小鼠的抗癫痫作用与NR2B/CaMKII/CREB信号通路的关系

结果

1龙胆苦苷对 Pilo诱发小鼠癫痫的神经保护与抗癫痫作用

2龙胆苦苷对 Pilo诱发癫痫小鼠的抗癫痫作用与 NR2B/CaKMII/CREB信号通路的关系

讨论

1 建立匹罗卡品诱发小鼠癫痫模型

2 龙胆苦苷对匹罗卡品诱发癫痫小鼠抗癫痫及神经保护效果的评价

3 龙胆苦苷对 pilo诱发癫痫小鼠的抗癫痫作用与 NR2B/CaMKⅡ/CREB信号通路的有关。

结论

图及相片

参考文献

文献综述:癫痫及其发病机制的研究进展

致谢

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