L型钙离子通道CaV1.2蛋白在大鼠七氟烷麻醉中的作用研究

摘要

目的探索 CaV1.2蛋白在大鼠七氟烷麻醉中的作用。方法 大鼠采用数字表法随机分为 5组（n=8）：对照组（control组）、七氟烷 1h组（sevo 1h）、七氟烷 2h 组（sevo 2h）、七氟烷 3h 组（sevo 3h）、七氟烷 4h组（sevo 4h）。control组吸入氧气复合空气，其余各组均为 2MAC左右七氟烷诱导麻醉，之后以1.5MAC左右七氟烷维持麻醉各 1h、2h、3h、4h。记录七氟烷麻醉下各组大鼠翻正反射消失的时间，监测并记录麻醉前（T1）、麻醉中（T2）、麻醉结束（T3）三个时间点大鼠生命体征。麻醉结束后心尖取血 0.5ml 进行血气分析，断头取脑进行蛋白水平的检测。激动剂组：进行量效关系分析，FPL64176 分为 0.1umol，1umol，10umol三个浓度梯度经大脑侧脑室置管给药，进行麻醉，记录麻醉诱导的时间（翻正反射消失），常规记录监测生命体征，麻醉结束后断头取脑进行 Western blot及免疫组化分析。抑制剂组：随机分为 3组（n=8）：control（含DMSO），sevo 4h，isradipine组，侧脑室置管给药，进行镇痛镇静评分。结果 HE染色表明 1.5MAC左右七氟烷对大鼠神经细胞无影响；各组大鼠翻正反射消失时间无差异；Western blot结果显示：与 control组比较，sevo 1h、sevo 2h、sevo 3h 、sevo 4h CaV1.2蛋白表达逐渐下降，且在 sevo 3h、 sevo 4h下降有统计学意义（P<0.05），并且 sevo 4h 与 sevo 3h相比下降也有明显差异（P<0.05）；免疫组化结果表明：与 control相比，CaV1.2阳性细胞表达依次减少有统计学意义（P<0.05）。激动机组：与 control组比较，FPL64176组的大鼠翻正反射消失的时间延长，有统计学意义（P<0.05）；Western blot结果表明：与 control组比较，FPL64176 组大鼠 CaV1.2蛋白表达明显增高有显著差异（P<0.05），sevo 4h +FPL64176组与 sevo 4h组相比 CaV1.2 蛋白表达增高有统计学意义（P<0.05）。免疫组化结果显示：与 control组比较，FPL64176组大鼠 CaV1.2 阳性细胞表达明显增高有显著差异（P<0.05），sevo 4h +FPL64176组与 sevo 4h组相比 CaV1.2细胞表达增高有统计学意义（P<0.05）。抑制剂组：Western blot结果表明：与 control相比，isradipine组 CaV1.2蛋白表达下降有统计学意义（P<0.05）。免疫组化结果表明：与 control相比，isradipine组 CaV1.2阳性细胞减少有显著差异（P<0.05）。与 control相比，isradipine组镇痛镇静评分（VOCR与 TRP评分）下降有统计学意义（P<0.05）。结论 七氟烷麻醉下 CaV1.2蛋白逐渐减少，增强 CaV1.2表达后麻醉诱导时间明显延长，抑制 CaV1.2后对大鼠有镇静镇痛作用。

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将大鼠俯卧位固定于麻醉台上，固定头端，调好多通道微量注射泵，单管微量匀速给药，观察大鼠状态，待药物达