枸杞总黄酮对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及机制探讨

摘要

黄酮类化合物在植物中广泛存在，也是许多植物药材的重要活性成分，对乳腺癌、肺癌、白血病、胃癌等都有良好的抑制作用，其效果包括抑制细胞增殖、抑制细胞周期、促进凋亡、抑制迁移与侵袭等。枸杞是我国传统名贵中药，具有抗炎、抗肿瘤等效果，黄酮类化合物也是其主要成分之一。但是，来源于枸杞的总黄酮对乳腺癌的作用目前尚无报道。 目的：探究枸杞总黄酮（TFLb）对不同类型乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭等能力的影响，并探讨其相关分子机制。 方法：选用雌激素受体 α（ERα）阳性的MCF-7乳腺癌细胞和三阴乳腺癌细胞 MDA-MB-231，使用不同浓度的TFLb 处理，检测其对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的作用。1. 使用 CCK-8 实验检测细胞增殖能力的变化，同时以正常乳腺上皮细胞 MCF-10A 作为对照；2. 通过细胞划痕实验和 Transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力的变化；3. 使用流式细胞术检测细胞周期与凋亡情况的变化；4. 使用 qPCR 检测 PCNA 等分子指标 mRNA的表达水平的变化；5. 使用 Western Blot检测 PCNA、MMP-2等分子指标在蛋白水平的变化；为明确 TFLb的作用机制，使用 Western Blot检测 RhoA、Rac1/Cdc42、ERα、NF-κB、β-catenin、Akt、mTOR 等细胞信号通路关键分子蛋白的变化。 结果：1. TFLb呈剂量依赖性抑制乳腺癌细胞增殖。作用 48h后，200μg·mL-1 TFLb 对 MCF-7 细胞、100μg·mL-1 TFLb 对 MDA-MB-231 细胞的抑制率超过90%，但是不抑制正常乳腺上皮细胞 MCF-10A的增殖。2. 45，90μg·mL-1 TFLb作用于 MCF-7、或者 30，60μg·mL-1 TFLb 作用于 MDA-MB-231细胞时对增殖无影响，但是能抑制乳腺癌细胞的迁移与侵袭能力。3. 45，90μg·mL-1 TFLb作用于 MCF-7 细胞周期被阻滞在 G0/G1 期，30，60μg·mL-1 TFLb 作用于MDA-MB-231 细胞时细胞周期被阻滞在 G2 期。4. 135μg·mL-1 TFLb 作用于MCF-7、或者 90μg·mL-1 TFLb 作用于 MDA-MB-231细胞时能促进细胞凋亡，并改变细胞内 Bcl-2/Bax 蛋白的比例。5. 分别用 45，90，135μg·mL-1 TFLb 作用于 MCF-7、和 30，60，90μg·mL-1 TFLb 作用于 MDA-MB-231细胞 48h 后，两株细胞内 Akt1的磷酸化水平降低，Akt和 β-catenin 蛋白减少，另外，MCF-7细胞中 RhoA、Rac1/Cdc42、NF-κB、ERα 蛋白含量降低，MDA-MB-231 细胞中 mTOR 与 Rac1/Cdc42仅在 90μg·mL-1 TFLb 作用时减少。 结论：TFLb 能抑制两种不同类型的乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭，抑制其细胞周期并促进凋亡，但是不抑制正常乳腺上皮细胞的增殖。TFLb 对MCF-7细胞和 MDA-MB-231 细胞的有效浓度存在差异，作用途径也有所不同，β-catenin 与 Akt是两株细胞中共同的效应位点。

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