肠毒素大肠杆菌CFA/I在痢疾杆菌中的表达及其免疫原性观察

摘要

现代免疫理论认为预防微生物引起的胃肠道传染病的一个重要的生理基础是黏膜免疫系统.分泌型IgA是粘膜免疫应答最重要的因子,sIgA能中和毒素,并能有效的防止微生物在粘膜表面的定居和对宿主细胞的侵袭.非肠道途径使用的疫苗不能有效地激发黏膜sIgA应答,所以对只定居在黏膜表面而不侵袭到深层组织的微生物免疫交果不佳.口服疫苗,尤其是减毒的口服活疫苗,因为能携带抗原至GALT,已经证实能有效的激发特异性的sIgA应答.该实验通过体外重组的方法,构建了包含asd基因和CFA/I基因的重组表达质粒PZHY21,与福氏志贺氏菌FW101构成了宿主-载休平衡致死系统.asd基因编码的天冬氨酸半醛脱氢酶是细菌赖氨酸,苏氨酸,蛋氨酸和二氨基庚二酸(DAP)合成途径中的一种关键酶,而DAP是革兰氏阴性菌细胞壁的主要组成成分.当asd基因缺失或插入失活时,不能合成DAP,菌种就会因此百溶解死亡.人们将宿主染色体的asd基因缺失,而将asd基因克隆至表达载体,转化asd的宿主时,缩主将恢复在基本培养基中生长的能力,这就构成了能够稳定表达外源基因的载体/宿主平衡致死系统.SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和WESTERN印迹表明,该重组菌株在没有抗生素条件选择的情况下,可以有效且稳定地表达CFA/I表达定居因了抗原蛋白.电镜结果显示,在重组菌株的菌体表面,表达产物能够有效地装配成菌毛.重组菌通过口服和饲免疫小鼠后,可以诱生相应的CFA/I的抗体和痢疾杆菌LPS抗体.

目录

摘要

英文缩写

前言

材料和方法

一、实验材料

(一)菌株和质粒

(二)培养基

(三)试剂及溶液

(四)其他

二、实验方法

实验结果

一.CFA1重组质粒和重组菌株的构建

1.CFA1重组质粒的构建

2.痢疾重组菌株的构建

二.CFA/I在重组菌株Fw101(pZHY21)中的表达

1.SDS-PAGE电泳结果

2.Western印迹结果

3.电镜观察和免疫电镜观察结果

三.重组菌的免疫原性研究

讨论

参考文献

综述

致谢