肽酰-脯氨酰顺反异构酶胞内活性分析的研究

摘要

肽酰-脯氨酰顺反异构酶胞内活性分析的研究摘要肽酰-脯氨酰顺反异构酶(peptidyl prolyl cis-trans isomerase,PPI)是多家族类蛋白质,基本功能是与蛋白质的脯氨酸残基结合,催化Xaa-Pro之间肽键的顺反异构反应.本研究旨在初步尝试建立PPI胞内活性检测的方法.基于RNase T1作为体外底物分析PPI活性已取得的研究成果,在探讨胞内PPI活性的研究中,利用分子生物学方法开展了一些研究,我们尝试在细胞内表达RNase T1作为PPI的作用底物.来自太平洋的水母(Aequorea vitoria)中的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein GFP)是近年来广泛应用的基因标签,但这种野生型的GFP比标准的报告蛋白(如:β-半乳糖苷酶)的检测灵敏度还低.其突变体EGFP(enhanced green fluorescent protein EGFP)具有野生型GFP 35倍的荧光强度,可用来指示上游蛋白正确折叠,在该研究中作为指示RNase T1正确折叠的

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第一章前言

1.肽酰—脯氨酰顺反异构酶

1.1肽酰—脯氨酰顺反异构酶的发现

1.2肽酰—脯氨酰顺反异构酶的功能

1.3肽酰—脯氨酰顺反异构酶的催化性能

2.绿色荧光蛋白的研究进展

2.1绿色荧光蛋白及其特点

2.2 GFP突变体

2.3 GFP及其突变体在分子生物学研究中的应用

3.本研究的目的与意义

第二章大肠杆菌内用于肽酰—脯氨酰顺反异构酶活性分析的表达载体构建

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

第三章加强型绿色荧光蛋白标记RNase T1在大肠杆菌中的表达

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

第四章毕赤酵母中肽酰—脯氨酰顺反异构酶活性分析的表达载体构建及其表达

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

论文总结

参考文献

致谢

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