脂质体介导EGFP基因转染骨髓间充质干细胞的实验研究

摘要

目的：体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)。脂质体介导法使BMSCs转染增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescentprotein,EGFP),观察转染后荧光表达的强度及时间,比较转染前后BMSCs生长特性的变化情况。探讨利用EGFP标记技术建立一套示踪标记干细胞的技术平台,为近一步观察BMSCs的体内移植分化奠定实验基础。
　　 方法：体外分离培养并鉴定大鼠骨髓间充质干细胞。提取扩增带有增强型绿色荧光蛋白基因表达的质粒(plamid of enhanced greenfluorescent protein,pEGFP)并鉴定该质粒,以脂质体介导法将质粒转染BMSCs。分析比较转染组及未转染组BMSCs细胞形态、生长曲线、贴壁率的变化情况。
　　 结果:1、体外分离培养的大鼠骨髓间充质干细胞贴壁呈梭形,集落样生长,细胞活性良好。2、脂质体介导法转染细胞后获得了表达绿色荧光蛋白的BMSCs(EGFP-BMSCs),荧光表达时间可持续达4周以上。3、转染后细胞形态、生长曲线、贴壁率与未转然组相比无明显的变化(P>0.05)。
　　 结论:1、骨髓间充质干细胞容易获取、来源充足、可以大量扩增。2、脂质体介导法的EGFP可标记BMSCs,且标记后不影响BMSCs的生长特性,可作为BMSCs的良好示踪标记物。