宫颈癌细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性及其表面TRAIL受体表达的研究

摘要

本研究的目的是通过检测宫颈癌细胞Hela表面TRAIL死亡受体(DR4、DR5)及诱骗受体(DcR1、DcR2)的表达差异，观察Hela细胞系对TRAIL蛋白诱导凋亡敏感程度，分析细胞系表面DR4、DR5与DcR1、DcR2表达的相对程度与TRAIL诱导凋亡敏感性间的差异。探讨TRAIL参与宫颈癌细胞凋亡的程度，为临床治疗宫颈癌提供实验依据。 [方法]：宫颈癌细胞株Hela的培养采用RPMI-1640培养基+10％灭活小牛血清。 (1)Hela细胞以每孔2×104个细胞的浓度接种于96孔板，不同终浓度(10,20,100，200μg·L-1)的TRAIL蛋白加入至Hela细胞，继续培养24h后，各孔加入10μLMTT(终浓度为0.5g·L-1)孵育4h。弃掉培养基，各孔加入100μL二甲亚砜，充分混匀，酶标仪检测490nm波长下各孔吸光值(A)。 (2)从Hela细胞中提取RNA，然后进行逆转录-聚合酶链(RT-PCR)反应。取扩增产物在2％琼脂糖凝胶上电泳，EB染色，紫外光下观察结果并照相保存，软件分析结果。 (3)细胞沉淀溶于200μlPBS，不同管中分别加入小鼠抗人DR4，DR5，DcR1，DcR2的单克隆抗体各1μL，4℃孵育30min，冷PBS洗涤两次。细胞沉淀重悬于含有FITC标记的兔抗鼠二抗的PBS溶液中，4℃孵育30min,冷PBS洗涤两次。最后将细胞沉淀溶于1mlPBS溶液中，上样流式细胞仪，检测样品平均荧光强度。 [结果]：宫颈癌细胞Hela对TRAIL诱导的细胞凋亡反应有较高的敏感性，在较低浓度(100ng/ml)TRAIL作用下，即可有接近50％的细胞杀伤率。Hela细胞表面DR4、DR5受体mRNA的表达明显高于DcR1、DcR2受体，有显著性差异(P＜0.01)，DR4、DR5受体之间及DcR1、DcR2受体之间表达没有显著性差异(P＞0.01)。FCM结果显示Hela细胞表面DcR1，DcR2受体蛋白的表达水平明显较DR4，DR5受体低，分别是DcR117.7％、DcR25.3％、DR499.9％、DR597.8％。 [结论]：通过培养人宫颈癌细胞Hela，应用MTT法检测TRAIL蛋白对宫颈癌细胞Hela的诱导凋亡率，表明Hela细胞对TRAIL诱导的细胞凋亡反应有较高的敏感性。然后进行RT-PCR反应，分析电泳结果，从而检测出宫颈癌细胞表面TRAIL受体DR4、DR5、DcR1、DcR2mRNA的表达水平；进行流式细胞技术，从而检测出宫颈癌细胞表面TRAIL受体DR4、DR5、DcR1、DcR2蛋白的表达水平。Hela细胞表面诱骗受体的表达水平明显较死亡受体低，诱骗受体之间及死亡受体之间表达无差别。说明宫颈癌细胞由于缺乏DCR1和DCR2的保护而易被TRAIL诱导细胞凋亡，预示着TRAIL在宫颈癌的治疗中具有良好的前景。

目录

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符号说明

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

附综述 TRAIL和宫颈癌细胞凋亡的研究

致谢