工业酿酒酵母菌株met10基因敲除及其用于工业生产可行性的研究

摘要

本研究采用LFH-PCR法从质粒pFA6a-kanMX4及酿酒酵母染色体上构建了两端带有酿酒酵母met10基因同源序列的具有G418抗性的外源基因片段。利用完整细胞转化法将构建的外源基因片段导入工业酿酒酵母细胞内，外源基因片段通过同源重组而整合于酿酒酵母染色体，破坏酿酒酵母met10基因从而得到met10基因敲除菌株。 通过1吨发酵罐发酵试验，比较了met10基因敲除菌株和原始酿酒酵母工业菌株的生长性状、发酵性能及啤酒中乙醛、酯、高级醇及亚硫酸盐等成份的含量，发现met10基因敲除菌株较原始菌株生长快、发酵度高、发酵周期短；啤酒中游离亚硫酸盐含量并未明显提高但啤酒中乙醛等醛类物质含量有较大程度的降低，从而提高了啤酒风味的稳定性；met10基因敲除菌株对于发酵液中的双乙酰还原能力较原始菌株差。通过100吨啤酒发酵罐发酵啤酒及贮存试验表明，met10基因敲除菌株酿造的啤酒比外加亚硫酸盐的啤酒口感更好，贮存时间也较长。

目录

原创性声明及关于学位论文使用授权的声明

摘要

第一章绪论

第二章酿酒酵母高效转化体系的建立

第三章外源基因的构建及转化子的筛选

第四章基因敲除菌株生长及发酵性状测定

第五章酿酒酵母染色体上G418抗性基因的剔除

全文总结

参考文献

致谢