黄芪对同种移植排斥过程中CD4CD25T细胞表型及相关分子影响的实验研究

摘要

高效非特异性免疫抑制剂的迅速发展和临床广泛应用使同种器官移植取得了长足的进步，急性排斥率明显降低，器官短期存活率显著提高。但是数十年来，由于慢性排斥和免疫抑制剂的毒副作用，使得器官移植的长期存活率无明显改善。因此诱导特异性移植耐受，预防急慢性排斥反应，减少药物的毒副作用<'[1]>，避免长期服用免疫抑制剂就成为解决移植器官长期存活的关键问题。既往研究表明维持对同种异型抗原免疫耐受的重要机制之一是通过产生负调节性T细胞<'[2]>而实现的。CD4<'+>CD25<'+>调节性T细胞是被新近认识的有负调节功能的T细胞亚群。其免疫负调节性表现在，一旦诱导后，可直接或间接下调效应细胞和APCs的活性，通过细胞之间直接接触或通过分泌IL-10和TGF-β而在局部抑制细胞因子、黏附因子、共刺激信号产生和活性细胞增殖。转录因子Foxp3是CD4<'+>CD25<'+>调节性T细胞的特征性标志之一。 黄芪作为传统的中药，对免疫系统具有双向调节作用而毒副作用轻微。根据以往关于黄芪调节机体免疫功能的研究结果，推测黄芪可能在诱导同种移植耐受中有重要作用。 本实验利用小鼠同种皮肤移植模型，研究单纯体内使用黄芪注射液和黄芪注射液加供体脾细胞预先注射对移植物存活时间、同种移植排斥中CD4+CD25’T细胞、Foxp3及某些细胞因子的影响，同时与经典的抗排斥药物环孢霉素(CsA)对比进行研究，目的在于试图阐明黄芪的免疫抑制及诱导耐受作用的机理，为研究利用黄芪诱导移植耐受提供实验依据。方法 建立小鼠同种皮肤移植模型，体内给予不同剂量黄芪注射液，观察其对移植物存活时间及小鼠脾细胞混合淋巴细胞反应的影响，确定黄芪注射液发挥负免疫调节的有效剂量；黄芪注射液(60g/Kg)单纯体内使用，黄芪注射液(60g/Kg)加供体脾细胞预先注射，和CsA加供体脾细胞预先注射，术后逐日观察移植皮肤存活情况及小鼠一般状况；应用<,3>H—TdR掺入法，研究黄芪注射液和CsA对混合淋巴细胞反应的影响；用免疫荧光染色流式细胞术检测同种移植小鼠脾组织中CD4<'+>CD25<'+>T细胞的动态变化；并提取脾组织总RNA，通过RT-PCR检测Foxp3的mRNA表达情况。应用放射免疫分析技术，检测移植后不同时间小鼠血清及脾细胞培养上清中细胞因子IL-10、IL-2含量的变化。 结果 1．与对照组相比，移植后体内应用黄芪注射液和黄芪注射液(60g/Kg)加供体脾细胞预先注射可以明显延长移植皮片的存活期。与CsA加供体脾细胞预先注射组相比无明显差异。 2．体内注射黄芪注射液(60g/Kg)可以明显抑制移植后第14天的小鼠混合淋巴细胞反应。 3．移植后第7天，体内应用黄芪注射液组和黄芪注射液(60g/Kg)加供体脾细胞预先注射组CD4<,+>CD25<'+>T细胞水平升高，Foxp3的相对表达量增多，第14天达到峰值，随后两者均下降，第21天恢复至初始水平，而对照组CD4<,+>CD25<'+>T细胞及Foxp3相对表达量无显著变化。 4．移植后体内应用黄芪注射液组和黄芪注射液(60g/Kg)加供体脾细胞预先注射组，第1、7天，小鼠血清及脾细胞体外培养上清中的lL-10呈明显上升趋势，第14天达最高峰，之后下降，在第21天降至初始水平；移植后第14天小鼠血清及脾细胞体外培养上清中的IL-2水平下降。 结论 1．体内单独应用黄芪注射液和黄芪注射液(60g/Kg)联合供体脾细胞预先注射均可明显延长同种移植皮片的存活时间。 2．体内单独应用黄芪注射液(60g/Kg)和联合使用供体脾细胞预先注射可抑制同种移植个体混合淋巴细胞反应，降低T细胞特异性回忆反应。 3．小鼠脾CD4<,+>CD25<,+>T细胞及其相关分子Foxp3/IL-10在同种移植排斥过程中发生同步变化。 4．体内单独应用黄芪注射液(60g/Kg)和联合使用供体脾细胞预先注射可 明显上调同种移植小鼠CD4<'+>CD25<'+>T细胞数量及相关分子 Foxp3/IL-10的活性。 5．体内应用黄芪注射液(60g/Kg)可以明显抑制同种移植排斥过程中IL-2的产生。

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前 言

试验材料和方法

实验结果

讨论

小结

参考文献

致谢

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