21-羟化酶缺乏症家系的基因突变研究

摘要

目的： 21-羟化酶缺乏症(21-OHD)是先天性肾上腺皮质增生症(CAtl)中最常见的一种类型，属于常染色体隐性遗传性疾病。编码21-羟化酶的基因(CYP21)位于6号染色体短臂上的HLAⅢ区域，由无活性的假基因和有活性的真基因组成，真假基因之间有高度同源性。大约95﹪的CYP21基因突变是由于真假基因相互作用引起的，其余5﹪的患者等位基因含有特别的突变，这仅发生在个别的家庭，它们代表了个别人群中的稀有等位基因。本研究通过对3个21－羟化酶缺乏症家系进行基因突变分析，明确患者基因突变位点及家系中突变位点的携带情况，探讨国人21－羟化酶缺乏症是否存在新的基因突变，从分子遗传学角度深入探讨21－羟化酶缺乏症的发病机制。 方法： 4例患者来自3个家系(2例为同胞姐妹)，收集患者及其部分家系成员的外周血，提取基因组DNA。设计出特异性的引物扩增两个相互重叠的特异性CYP21基因片段，对扩增产物直接测序，测序结果与正常参考序列对比：选取位于CYP21基因上游及下游附近的二核苷酸重复序列(CA)多态位点D6S273和D6S291进行基因型分析。 结果： 1、以患者及其家系成员和正常人基因组DNA为模板，经PCR扩增反应，1﹪琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色，紫外光照相均显示出一条清晰条带，两对引物扩增产物大小与预期大小相符，患者两个PCR扩增条带和正常人相应片段大小一致，说明患者CYP21基因中没有大片段的缺失或插入。 2、CYP21基因序列分析共检测到6种突变类型。家系1中患者CYP21基因存在4种杂合突变：E6cluster、Q318X、A391T、P459H，其中前3种突变串联排列于同一条染色体上，P459H突变目前国内外尚未见报道，A391T为罕见突变；家系2中患者CYP21基因存在E6cluster、R483W2种杂合突变，其中R483W为罕见突变类型；家系3中患者第4外显子存在I172N纯合突变。 3、利用微卫星D6S273和D6S291多态性位点对3个家系进行了连锁分析，所得结果与测序结果相一致。 结论： 1、在3个21-羟化酶缺乏症家系中共检测出6种突变类型，其中A391T、R483W为罕见突变类型，P459H为新的突变类型。P459H突变可造成21-羟化酶缺乏症。 2、这3种突变均不是假基因(CYP21P)的序列，说明在有丝分裂过程中不存在CYP21P到CYP21基因的微小序列转换，它们的产生可能为随机突变所致。 3、相同临床表型的患者其基因型可不同，即同一临床表型可由不同的基因突变引起。

目录

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符号说明

前 言

材料和方法

结 果

讨 论

结 论

附表

附图

参考文献

综述21-羟化酶缺乏症研究进展

致 谢

攻读硕士学位期间发表论文