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第一章文献综述
1.1粘细菌的滑行运动
1.1.1黄色粘球菌的双运动系统
1.1.2 mgl和frz基因座
1.1.3黄色粘球菌的滑动运动特性
1 2粘细菌的子实体发育
1.2.1粘细菌子实体发育的形态生成
1.2.2粘细菌子实体发育过程中的信号
1.3海洋粘细菌的研究
1.3.1海洋嗜盐粘细菌
1.3.2海洋耐盐粘细菌
1 4 mariner转座因子及其应用
1.4.1 mariner转座因子概述
1.4.2 mariner转座因子的转座机制
1.4.3 mariner转座因子的应用
1.5本文工作开展的思路及研究内容
第二章耐盐橙色粘球菌M.fulvus HW-1社会运动突变株的筛选及性质分析
2.1实验材料
2.1.1菌株及质粒
2.1.2培养基
2.1.3实验试剂
2.1.4仪器设备与耗材
2.2实验方法
2.2.1质粒pMiniHimarl-lacZ的酶切验证和提取
2.2.2抗生素卡那霉素抗性分析
2.2.3转座子突变及社会运动突变株的筛选
2.2.4突变子的保存
2.2.5 X-gal平板显色实验
2.2.6运动能力的分析
2.2.7子实体形成和粘孢子发育能力的分析
2.2.8细胞外基质与染料结合能力分析
2.2.9细胞聚集实验
2.2.10扫描电子显微镜分析细胞外基质
2.3结果与分析
2.3.1橙色粘球菌M.fulvusHW-1随机突变菌库的建立
2.3.2社会运动突变株的筛选
2.3.3社会运动突变株表型检测及性质分析
2.4本章小结
第三章运动与发育相关基因簇mts的克隆分析及功能验证
3.1实验材料
3.1.1菌株及质粒
3.1.2培养基
3.1.3实验试剂
3.1.4仪器设备与耗材
3.2实验方法
3.2.1粘球菌基因组DNA的提取
3.2.2突变子HL-1中转座子插入位点的确定
3.2.3 Tail-PCR
3.2.4基因簇mrs的生物信息学分析
3.2.5质粒载体的构建
3.2.6黄色粘球菌的电转化及突变株的筛选和纯化
3.2.7运动能力的检测
3.2.8子实体形成和粘孢子发育能力的检测
3.2.9 X-gal平板显色实验
3.3结果与分析
3.3.1基因簇mrs的克隆与分析
3.3.2橙色粘球菌M.fulvus HW-1 mtsC基因的缺失
3.3.3 M.xanthus DKl622中mrs同源基因簇的功能和表达分析
3.4本章小结
第四章MtsB及其同源蛋白的功能机制初探
4.1实验材料
4.1.1菌株及质粒
4.1.2培养基
4.1.3实验试剂
4.1.4仪器设备与耗材
4.2实验方法
4.2.1质粒载体的构建
4.2.2荧光蛋白融合表达菌株的构建
4.2.3荧光的检测
4.2.4 X-gal平板显色实验
4.2.5融合蛋白在大肠杆菌中的异源表达及检测
4.2.6融合蛋白包涵体的提取和纯化
4.2.7蛋白浓缩及浓度的检测
4.2.8融合蛋白抗体的制备
4.3结果与分析
4.3.1荧光蛋白融合表达对MtsB同源蛋白的细胞定位
4.3.2 MtsB及其同源蛋白的异源表达
4.3.3融合蛋白MtsB和MXAN1333抗体的制备
4.4本章小结
第五章M.fulvusHW-1分散生长诱变株的筛选和性质分析
5.1实验材料
5.1.1菌株及质粒
5.1.2培养基
5.1.3实验试剂
5.1.4仪器设备与耗材
5.2实验方法
5.2.1紫外诱变
5.2.2分散生长能力的检测
5.2.3普通形态学分析
5.2.4运动能力的检测
5.2.5耐盐能力分析
5.2.6电转化
5.2.7转化突变子假阳性分析
5.3结果与分析
5.3.1分散生长突变株的筛选
5.3.2 M.fulvus UV684菌株性质分析
5.3.3 M.fulvus UV684菌株的遗传操作
5.4本章小结
总结与展望
附录
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文
发表论文1
英文论文2