栀子苷通过miRNA/STAT1促进巨核细胞分化成熟治疗原发免疫性血小板减少症的机制研究

摘要

目的：探索栀子苷通过影响miRNA/STAT1信号通路影响巨核细胞分化成熟和血小板生成，分析蒙药齐顺保利尔治疗原发免疫性血小板减少症（Immune thrombocytopenic purpura，ITP）的分子机制。方法：使用血小板生成素（Thrombopoietin，TPO）、白介素-3（Interleukin-3， IL-3）和干细胞因子（Stem cell factor，SCF）诱导人脐带血CD34+造血干细胞向巨核细胞分化。利用流式细胞术分析巨核细胞表面标记分子CD41和CD61的表达量；利用荧光定量PCR或者western blot检测miRNA分子和STAT1的表达；利用荧光素酶报告基因法研究miRNA和STAT1 3’-非编码区（3’-UTR）结合情况。诱导巨核细胞分化之前， CD34+造血干细胞转染miRNA mimic或inhibitor过表达或者干扰沉默相应miRNA的细胞水平，收集细胞检测STAT1表达。采用ITP动物模型验证栀子苷通过miRNA/STAT1信号通路促进巨核细胞成熟和血小板生成，检测骨髓巨核细胞数量，收集外周血对血小板计数，并分离巨核细胞，检测miRNA分子及靶蛋白表达变化。 结果： 1. CD34+造血干细胞经诱导分化成巨核细胞，细胞表面标记分子CD41/CD61比例增加。 2. 栀子苷促进CD41/CD61比例增加，即促进巨核细胞分化成熟。 3. 栀子苷显著抑制分化成熟的巨核细胞内 miR-23a、miR-185-5p和miR-495-3p的表达。 4. miR-23a和miR-495-3p通过与STAT1 3’-UTR结合靶向调控STAT1的表达。 5. 在ITP模型小鼠中，miR-23a和miR-495-3p过表达均显著抑制栀子苷促进血小板生成的作用。 结论： 1. 栀子苷可以有效促进巨核细胞的成熟和血小板释放； 2. miR-23a和miR-495-3p均可靶向调控巨核细胞STAT1表达； 3. miR-23a和miR-495-3p均可通过调控STAT1信号介导栀子苷促巨核细胞成熟的过程。

目录

缩 略 语 表

1 引 言

2.1 实验细胞

2.2 试剂和材料

2.3 方法

2.4 统计学分析

3 结 果

3.1 栀子苷对CD34+造血干细胞向巨核细胞分化影响

3.2 栀子苷对巨核细胞miRNA表达的影响

3.3 栀子苷对巨核细胞STAT1表达的影响

3.4 miRNA靶向调控STAT1

3.5 过表达或干扰沉默miR-23a和miR-495-3p对STAT1表达的影响

3.6 栀子苷通过miR-23a/miR-495-3p调控STAT1促进巨核细胞成熟的体内验证

4 讨 论

5 结 论

6 结 语

参考文献

综述:原发免疫性血小板减少症的研究进展

致谢

作 者 简 介

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