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前 言
第一部分 筛选能够提高神经内肽酶活性的药物
1. 材料
2.方法
2.1细胞的培养
2.2MTT试验
2.3神经内肽酶活性检测
2.4统计学处理
3.结果
3.1最佳药物浓度的确定
3.2各天然药物对神经内肽酶活性的影响
3.3人参皂苷Rb1与Rg3对神经内肽酶活性的影响
4.讨论
第一部分总结
第二部分表达瑞典突变型APP695的SK-N—SH细胞的制备与鉴定以及人参皂苷Rb1与人参皂苷Rg3神经保护作用的研究
1. 材料
2.方法
2.1瑞典突变型APP695表达载体pcDNA3.1-sweAPP695的构建
2.2细胞的培养
2.3细胞转染实验
2.4Western Blot检测
2.5酶联免疫吸附试验检测Aβ42和Aβ40分泌情况
2.6流式细胞术检测细胞内氧自由基水平
2.7流式细胞术检测细胞内钙离子水平
2.8 流式细胞术检测细胞凋亡
2.9统计学处理
3. 结果
3.1 pcDNA3.1-sweAPP695重组质粒的鉴定
3.2Western Blot检测转染后sweAPP695蛋白的表达
3.3 ELISA检测转染后细胞外Aβ42和Aβ40浓度
3.4 sweAPP-SK细胞增殖能力变化
3.5sweAPP-SK细胞凋亡检测及人参皂苷Rbl与Rg3对细胞凋亡的影响
3.6sweAPP-SK细胞内活性氧水平检测及人参皂苷Rb1与Rg3对细胞内活性氧水平的影响
3.7 sweAPP-SK细胞内钙离子水平检测及人参皂苷Rb1与Rg3对细胞内钙离子水平的影响
3.8 人参皂苷Rb1及人参皂苷Rg3对凋亡相关蛋白的影响
4. 讨论
第二部分总结
第三部分 人参皂苷Rb1及人参皂苷Rg3升高神经内肽酶活性机制的研究
1.材料
2.方法
2.1 细胞培养
2.2 Western Blot检测
2.3 实时定量PCR及逆转录PCR检测
2.4 人nep基因转录起始点上游2.9Kb调控序列的扩增
2.5 2.9Kb启动子片段的T-载体亚克隆
2.8 细胞转染实验
2.9 双荧光素酶活性测定
2.10统计学处理
3.结果
3.1 Western Blot检测人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg3对nep基因表达的影响
3.2 RNA水平检测人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg3对neprillisin基因表达的影响
3.3 荧光素酶报道基因载体-nep启动子(pGL3-nep2.9Kb)的鉴定
3.4 荧光素酶报道基因载体-nep启动子(pGL3-nep2.4Kb)的鉴定
3.5 人参皂苷Rb1与人参皂苷Rg3对nep启动子活性的影响
4.讨论
第三部分工作总结
附图
参考文献
致谢
博士在读期间发表的论文
发表论文一
发表论文二