烧伤大鼠肠粘膜细胞凋亡变化及重组人生长激素调控作用的研究

摘要

目的： 本研究在以往我们对严重烧伤后早期应用重组人生长激素（rhGH）实验及临床研究的基础上，仍采用能够引起肠道损伤及肠源性感染的烧伤后免疫抑制大鼠模型，模拟临床严重烧伤后患者处于免疫功能低下时所发生的病理生理变化，以观察严重烧伤大鼠肠粘膜细胞凋亡的变化规律；早期应用rhGH对严重烧伤大鼠肠粘膜细胞凋亡的作用，探讨其作用机制以及联合应用rhGH和美罗培南对烧伤后大鼠肠源性感染及预后的作用。 方法： 成年健康雄性Wistar大鼠共计172只，随机分为对照组、烧伤组、rhGH组（简称GH组）、美罗培南组和rhGH+美罗培南组，后四组造成25％总体表面积（TBSA）Ⅲ度烧伤创面，立即腹腔注射地塞米松80mg/kg，腹部皮下注射等渗盐水（NS）50mL/kg抗休克。GH组于伤后2h开始皮下注射rhGH[长春金赛药业有限公司，1.33IU/（kg·d）]；美罗培南组于伤后2h开始左臀肌肌肉注射美罗培南（日本住友制药株式会社）20mg/kg；GH+美罗培南组二者联用；烧伤组在相应部位注射等量NS连续3d共4次。 （1）成年健康雄性Wistar大鼠36只，随机分为对照组（6只）和烧伤组（30只），于伤后6h、12h、1d、3d、5d，通过流式细胞仪、HE染色和原位末端标记法（TUNEL法）、肠粘膜细胞Caspase-3酶活性测定检测严重烧伤大鼠肠粘膜细胞凋亡的变化规律。 （2）成年健康雄性Wistar大鼠42只，对照组（6只）、烧伤组（18只）和rhGH组（简称GH组，18只），于伤后12h、1d、3d，通过HE染色、TUNEL法和肠粘膜细胞Caspase-3酶活性测定检测严重烧伤大鼠早期应用rhGH对肠粘膜细胞凋亡的影响。 （3）成年雄性Wistar大鼠94只，随机分为对照组（6只）、烧伤组（22只）、GH组（22只）、美罗培南组（22只）和GH+美罗培南组（22只），于伤后3d、7d和10d，通过肠系膜淋巴结（MLN）细菌学检查、HE染色法和7d大鼠体重变化和10d生存率检测，观察联合应用rhGH和美罗培南对严重烧伤大鼠肠源性感染和预后的影响。 结果： （1）流式细胞仪检测、HE染色、TUNEL法和肠粘膜细胞Caspase-3酶活性检测显示：大鼠烧伤后肠粘膜上皮细胞凋亡数较对照组升高，于1d达到高峰，以后逐渐下降，但均明显高于对照组（P<0.01）。 （2）烧伤组肠粘膜形态结构及上皮细胞损伤严重，GH组明显减轻，基本接近对照组。在伤后各时相点，烧伤组及GH组肠粘膜上皮细胞凋亡率均较对照组显著增加（P<0.01），但GH组显著低于烧伤组（P<0.01），两组均于伤后24h达高峰（15.40％±3.21％vs38.80％±6.98％）；烧伤组及GH组Caspase-3酶活性亦明显高于对照组（P<0.05），GH组明显低于烧伤组（P<0.05），亦于伤后24h达高峰（156.13±4.66U/mgvs214.60±9.29U/mg）。 （3）联合应用rhGH和美罗培南组MLN未检出细菌，未发现脏器脓肿，体重下降明显轻于其他组（P<0.05），器官结构接近正常，伤后10d无死亡。 结论： （1）严重烧伤后大鼠肠粘膜细胞凋亡增加，于伤后ld达到高峰，之后逐渐下降。 （2）早期应用rhGH能明显抑制严重烧伤大鼠肠粘膜上皮细胞凋亡，可能通过下调Caspase-3酶活性抑制肠粘膜细胞凋亡，减轻肠粘膜损伤，维护其形态结构与屏障功能。 （3）早期联合应用rhGH和美罗培南能有效控制肠源性感染，降低死亡率。

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