WGA、RCA-I和ECL凝集素受体在过量维甲酸致昆明小鼠腭裂发生中的作用

摘要

目的：腭裂是发病率较高的一种先天性颌面部发育缺陷，一般认为，它的病因为基因和环境因素的联合作用。腭的形成是一个极其复杂的生物学过程，受到诸多基因及调节因子的的严密调控，其中任何调节因子及相关基因的表达异常，都可能导致腭裂的发生。凝集素受体即是这些调节因子中的一员。
　　 凝集素受体是一类分布于细胞膜表面的糖蛋白、糖脂等糖复合物。凝集素受体上具有能被凝集素特异识别并结合的糖基。它们在细胞的生长、分化、细胞之间的黏附及相互识别中起重要作用。维甲酸(RA)是维生素A在体内的自然活性代谢物，也是胚胎发育过程中不可缺少的形态发生素。在小鼠腭组织发育敏感期，RA可诱发子代发生腭裂。本研究以昆明小鼠为研究对象，在RA致小鼠腭裂畸形动物模型上，利用亲和细胞化学法探讨麦胚凝集素(wheat germagglutinin，WGA)、蓖麻凝集素(ricinus communis agglutinin，RCA-I)和鸡冠珊瑚树凝集素(erythrina cristagalii lectin，ECL)三种受体在RA致胚胎腭裂畸形发生中的表达状况和变化规律，以期阐明上述三种凝集素受体在过量RA致腭裂的发生机制，为腭裂的预防与治疗提供实验依据。
　　 方法：⑴RA致昆明小鼠腭裂畸形动物模型的建立：下午六时，昆明小鼠雌雄2:1合笼，次日早上阴栓阳性雌鼠定为孕0天(gestation day0，GDO)。孕鼠随机分为实验组和对照组。实验组于GD10，一次性灌服RA芝麻油悬浮液，剂量为80mg/kg，对照组于相同时间一次性灌服等量芝麻油。⑵麦胚凝集素(WGA)受体、蓖麻凝集素(RCA-I)受体及鸡冠珊瑚树凝集素(ECL)受体的检测:实验组和对照组孕鼠各随机分为8小组，分别于GD138、GD1314、GD1322、GD148、GD1414、GD1422、GD158和GD1522等8个时间点剖宫取胚，常规石蜡切片。采用亲和细胞化学法检测WGA受体、RCA-I受体和ECL受体在各组不同时点腭板上皮和间充质中的表达和分布状况。
　　 结果：①WGA受体亲和组织化学染色结果：在正常对照和实验各组的腭板上皮及其间充质中WGA均有不同程度的表达。图象分析结果显示，伴随胚胎发育，WGA在对照组腭板上皮中的表达量呈现先逐渐上升(GD138～GD1322)，而后逐渐下降(GD1322～GD1522)的趋势。其峰值出现于GD1322时。在实验组，其表达量则呈逐渐下降的趋势。除GD138时明显高于对照组(P＜0.05)，GD1314和GD1522时与对照组无显著性差异外，其余各时间点均明显低于相应对照组(P＜0.05，P＜0.01)。无论在对照组还是在实验组，WGA在间充质中的表达量均明显低于在腭板上皮中的表达量。无论在对照组和实验组，WGA在间充质中的表达量均呈现逐渐下降的趋势，在各个时间点上，实验组和对照组的表达量之间均无显著性差异(P＞0.05)。②RCA-I受体亲和组织化学染色结果：在正常对照组和实验组腭板上皮和间充质中，RCA-I也均有不同程度的表达。图象分析结果显示，伴随胚胎发育，RCA-I在对照组腭板上皮中的表达量呈现逐渐上升的趋势，其峰值出现于GD158时。在实验组，伴随胚胎发育，RCA-I表达量的波动较大，但其总趋势与对照组大体相仿。除GD138和GD1414外，实验组腭板上皮中RCA-I的表达量均显著低于相应对照组(P＜0.05，P＜0.01)。在对照组和实验组，RCA-I在间充质中的表达量均明显低于在腭板上皮中的表达量；而且均呈现先下降而后逐渐上升的趋势，但在各个时间点上，实验组和对照组之间均无显著性差异(P＞0.05)。③ECL受体亲和组织化学染色结果：在正常对照组和实验组腭板上皮和间充质中，ECL均有不同程度的表达。图象分析结果显示，伴随胚胎发育，ECL在对照组腭板上皮中的表达量呈现先逐渐上升(GD138～GD1322)，而后逐渐下降(GD1322～GD1414)，最后又大幅上升(GD1414～GD1522)的趋势。在实验组腭板上皮，其变化趋势与对照组大体相仿，在各个时间点，其表达量均显著低于相应对照组(P＜0.05，P＜0.01)。在对照组和实验组ECL在间充质中的表达量均明显低于在腭板上皮中的表达量，两者的走势均无明显规律性；在各个时间点上，两组间均无显著性差异(P＞0.05)。
　　 结论：⑴在腭的正常发育过程中，WGA、RCA-I、ECL三种凝集素受体的表达均呈现规律性的变化，但趋势存在明显差异。它们可能参与对腭板发育的调节。⑵WGA、RCA-I、ECL三种凝集素受体在腭板上皮中表达水平的下降可能与过量RA致小鼠腭裂畸形发生相关。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：符号说明

声明

前言

材料和方法

结果

讨论

结论

附图

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文