免疫性血小板减少症患者IL-18及IL-18受体的研究

摘要

免疫性血小板减少症(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)是一种自身免疫性出血性疾病,该病特点是患者体内抗血小板抗体增多,血小板破坏过多而出血。其发病机制复杂,可能涉及T细胞、B细胞、巨核细胞、细胞因子、转录因子等多因素错综复杂的关系,尤其是T细胞免疫在巨核细胞受抑和血小板破坏中发挥了关键性作用。早期研究的重点多集中于体液免疫异常,证明了血小板特异性抗体与血小板抗原结合后,致敏的血小板通过Fc受体被网状内皮系统吞噬破坏(特别是脾脏中的单核吞噬细胞),从而引起血小板的减少。目前,随着研究的逐步深人多转向于细胞免疫异常,许多研究涉及到B7/CD28/CTLA-4和CD40/CD40L的共刺激信号,诱发了ITP患者Th1类细胞的过度极化。大多数观点认为Th1过度极化是导致ITP发生的重要机制[1,2],但也有相反或不一致的报道。当前ITP发病机制的焦点集中于Th1/Th2细胞之间的失衡,白介素18(IL-18)作为T细胞炎性介质强有力的诱导者,通过刺激Th1型反应,诱导严重的免疫紊乱。本研究通过检测Th细胞的上游基因T-bet(T-boxexpressed in cells)和GATA-3(GATA binding protein-3)在ITP患者中的表达,首次利用T-bet/GATA-3作为ITP患者Th1/Th2细胞失衡的敏感指标,验证了Th1类细胞因子在该病中的优势应答,并首次报道IL-18及IL-18R在其发病及治疗观察中的作用。
　　 研究目的:通过检测新诊断的ITP患者用药前后外周血白介素18(IL-18)和CD+3细胞表面IL-18受体α链(IL-18Rα)的表达,外周血单个核细胞中转录因子T-bet和GATA-3mRNA的表达；探讨IL-18及IL-18R在ITP患者Th1类细胞因子优势应答中的作用及发病中的效应机制。
　　 研究方法:以山东大学齐鲁医院门诊及住院治疗的18例新诊断的ITP为研究对象,应用逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polvmerase chain reaction,RTPCR)检测患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中Th细胞上游基因T-betmRNA和GATA-3mRNA的表达；应用ELISA检测血浆中IL-18的变化；应用流式细胞术检测CD3+细胞和总淋巴细胞表面IL-18R的表达；正常对照均为与试验组匹配的健康志愿者。
　　 主要结果:新诊断的ITP患者血浆中IL-18的含量为(468.57±141.62)pg/ml,显著高于对照组(P<0.05)；CD3+细胞表面及淋巴细胞表面IL-18Rα的表达分别为(8.50±3.16)％和(9.16±2.98)％,两者之间无统计学意义,但两者均显著高于对照组(P<0.05)；PBMCs中IL-18mRNA、T-betmRNA和GATA-3mRNA的表达分别为0.12±0.02、0.07±0.02和0.0039±0.0014,IL-18mRNA和T-betmRNA显著高于对照组(RR=1.66和3.65,P<0.05),而GATA-3mRNA显著低于对照组(下调至正常对照的0.69倍,P<0.05),T-bet/GATA-3比例显著增高。ITP缓解期T-betmRNA与GATA-3mRNA表达水平与正常对照比较均无统计学意义(P>0.05),T-bet/GATA-3基本恢复正常；血浆中IL-18和CD3+细胞表面IL-18R的表达也基本恢复正常。
　　 结论:IL-18与ITP的发生发展有关,新诊断的ITP表现为Th1细胞优势应答,T-bet/GATA-3mRNA明显失衡,T-bet/GATA-3可作为ITP患者Th1类细胞极化的敏感指标；该研究首次从蛋白和基因水平说明IL-18和IL-18R可能上调了新诊断的ITP患者Th1类细胞的表达,通过调整T-bet/GATA-3的比例,恢复Th1/Th2的平衡,有望为ITP的治疗提供一个新的策略或治疗靶点。

目录

文摘

英文文摘

CONTENTS

缩略语

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

不足之处

附图表

参考文献

文献综述

参考文献

致谢

攻读学位期间发表的学术论文目录

学位论文评阅及答辩情况表