姜黄素对大鼠肝脏热缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

摘要

目的：
　　 研究姜黄素(curcumin)预处理对大鼠肝脏热缺血再灌注损伤(IRI)的保护作用及其机制。
　　 方法
　　 1.动物分组及实验模型的建立：
　　 将60只Wistar大鼠随机分为假手术(SO)组、缺血再灌注(VR)组和姜黄素(CUR)组(n=20)。参照Ohmori方法建立动物模型，阻断肝左、中叶血供40分钟后恢复血供灌注90分钟，灌注完成留取标本。I/R组于术前2h腹腔注射二甲基亚砜(DMSO)lml；CUR组于术前2小时按60mg/kg体重腹腔注射溶于DMSO的姜黄素lml:假手术组仅行麻醉、开腹、游离第一肝门，不阻断肝门血供。
　　 2.肝功血清酶谱测定：
　　 取血样4ml～6ml，在4℃高速恒温离心机中离心后取上层血清，采用Olympus5400全自动生化分析仪检测各组大鼠血清中ALT、AST、LDH的水平.
　　 3.病理学检查：
　　 将肝脏放入10％的多聚甲醛固定24小时，经历脱水、石蜡包埋、切片、脱蜡、脱水、苏木精-伊红(HE)染色等步骤，在光镜下观察肝组织病理学改变；
　　 4.MPO含量的测定：
　　 取部分肝脏，制备10％的肝组织匀浆，按试剂盒说明书步骤操作，测定出各组髓过氧化物酶(MPO)的含量。
　　 5.ELISA法检测肝组织中TNF-α、MIP-2的含量：
　　 将肝组织匀浆放入4℃离心机中高速离心5分钟，取上清液。用BCA法测定组织蛋白浓度，然后分别用大鼠TNF-α、MIP-2的ELISA试剂盒检测组织中TNF-α，MIP-2的含量，结果用[pg/mg(pr0)]表示。
　　 6.核蛋白NF-kB(P65)含量测定(Westemblot法)：
　　 分离提纯核蛋白，用Bradford法测定蛋白浓度。将胶板置入电泳槽中，在70V电压下预电泳30分钟。上样后，先在30V电压下电泳60分钟。然后在100V电压下电泳90分钟。电泳结束后，进行蛋白转膜，将NC膜用5％脱脂牛奶封闭l小时。在4℃条件下用浓度为(1：500)的NF-kB(P65)抗体溶液孵育12小时，PBST洗膜后，置入浓度为(1：5000)二抗溶液中孵育90分钟，PBST洗膜。在暗室内显影、定影。晾干胶片，拍照，用Alpha Innotech2200半定量分析软件，测定各组的积分吸光度值，结果用histoneH1校正。
　　 结果
　　 1.与SO组相比，I/R组血清ALT、AST、LDH均明显增高(P<0.05)；肝组织匀浆中MPO活性，TNF-a、MIP-2水平及胞核中NF-k3(P65)蛋白表达量均明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)；
　　 2.经姜黄素预处理后，CUR组血清ALT、AST、LDH水平较I/R组均明显下降(P<0.05)，肝组织匀浆中MPO活性，TNF-a、MIP-2水平及肝细胞核中NF-kB(P65)蛋白表达量均明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)。
　　 3.病理切片显示：SO组肝组织形态正常，细胞索排列规整，血窦不扩张，无中性粒细胞浸润；CUR组肝细胞索排列轻度紊乱，部分肝细胞、内皮细胞水肿，出现空泡样变性，汇管区可见轻度中性粒细胞浸润；I/R组肝细胞索结构紊乱，内皮细胞及肝细胞普遍水肿，空泡样变性明显，中央区出现局灶性细胞坏死，血窦内有红细胞淤积，部分肝血窦变窄或消失，汇管区有中性粒细胞浸润。
　　 结论
　　 1.姜黄素预处理能减轻大鼠肝脏的缺血再灌注损伤。
　　 2.在缺血再灌注过程中，姜黄素能够抑制NF-KB活化，下调炎性因子TNF-a、MIP-2的表达。
　　 3.在缺血再灌注过程中，姜黄素能够减轻组织中性粒细胞浸润程度，发挥对肝脏的保护作用。

目录

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讨论

结论

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综述

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