乳腺导管增生性病变和浸润性乳腺癌MTDH蛋白表达及SNP筛选的研究

摘要

目的：观察乳腺普通型增生(usual ductal hyperplasia, UDH)、不典型增生(atypicalductal hyperplasia，ADH)、原位癌(ductal carcinoma in situ, DCIS)及浸润癌(invasivebreast carcinoma，IBC)中MTDH的表达，探讨MTDH在乳腺疾病发生进展过程中的作用。并筛选MTDH基因新的功能性多态位点，探讨其与乳腺癌的关系。方法：本实验采用免疫组织化学SP三步法检测80例乳腺导管内增生性病变，162例浸润性乳腺癌和7例正常乳腺组织标本中MTDH的表达。提取65例乳腺癌和60例正常健康人血液基因组DNA，利用PCR扩增和直接测序法，筛选出新的SNP位点。用SPSS13.0软件对所得数据进行统计分析。
　　 结果：
　　 1.免疫组化染色结果显示，在增生性病变中，MTDH蛋白高表达率分别为UDH24.14％(7/29)，ADH28.57％(4/14)，DCIS72.97％(27/37)，在正常组织中，MTDH的表达率为0％(0/7)，而在浸润性乳腺癌中其高表达率为55.56％(90/162)。统计分析，从正常乳腺组织到导管内增生性病变再到浸润性癌的发展过程中，MTDH蛋白的表达有逐渐升高趋势，统计学分析有显著性差异(P＜0.001)。
　　 2.在DCIS中，MTDH的高表达与细胞增殖指标Ki67高表达相关(P=0.008)，在低级别导管内癌MTDH的高表达率为59.09％(13/22)，而在高级别导管内癌MTDH的高表达率为93.33％(14/15)，两者差异有统计学意义(P=0.028)。
　　 3.在浸润性乳腺癌中，MTDH的高表达分别与患者的年龄(P=0.042)、Ki67增殖指数(P=0.036)、ER表达状态(尸=0.018)和P53表达状态(P=0.001)相关，差异有统计学意义(P＜0.05)。结果显示MDTH高表达的乳腺癌患者较年轻，Ki67增值指数高，ER阴性表达，P53高表达。
　　 4.PCR扩增和直接测序法结果显示（SNP位点筛选），在MTDH基因5’上游区和外显子12的3'UTR区发现多处SNP位点，包括-470G＞A、-200G＞A、2928C＞T、3088A＞G、3540T＞C。MTDH外显子12的3'UTR区的3个SNP位点(2928C＞T、3088A＞G、3540T＞C)之间均处于完美连锁不平衡状态，D’=1，r2=1。在我们的研究人群中只检测到2个单倍型，C2928A3088T3540（野生型）和T2928G3088C3540（突变型）。
　　 5.乳腺癌患者组与正常对照组之间，5个SNPs位点的基因型和等位基因频率分布均无统计学差异（P＞0.05）。
　　 结论：
　　 1.在正常乳腺组织，MTDH蛋白不表达或者低表达，但是从普通型增生、不典型增生到导管原位癌，MTDH的表达强度和水平逐渐增高。研究结果表明MTDH可能在乳腺导管内增生性病变的发生进展中发挥一定作用。在导管内癌中MTDH蛋白表达水平比浸润性乳腺癌高，表明MTDH可能在乳腺癌发生的起始阶段中起重要作用。
　　 2.MTDH在高增殖活性的浸润性乳腺癌和DCIS病例中高表达，MTDH过表达与细胞高增殖活性相关。
　　 3.在UDH、ADH和DCIS中，MTDH蛋白的表达强度和阳性率不同。在UDH和ADH，MTDH蛋白表达强度及表达率均低于高级别导管内癌，说明MTDH可能在正常细胞到肿瘤细胞的转化过程中起一定作用。
　　 4.在浸润性乳腺癌中，MTDH高表达的患者发病年龄低、ER阴性、P53过表达和Ki67高表达，提示MTDH是一个临床预后不良的指标。
　　 5.在筛选出的MTDH基因5个新的SNP位点中，未发现与乳腺癌易感性相关的位点。

目录

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实验材料与方法

结果

讨论

结论

附图

参考文献

致谢

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