免疫细胞化学染色和ELISA检测尿液足细胞的方法学评价

摘要

研究目的:
　　 足细胞即肾小球脏层上皮细胞，与内皮细胞和肾小球基底膜共同构成肾小球滤过屏障，以保证肾小球毛细血管壁的选择通透性。足细胞损伤和脱落是肾小球疾病最早期的病理改变，目前判断肾小球疾病损伤程度的金指标是肾活检，但其具有创伤性，不易被患者接受，故不能常规用于病情的追踪观察，而尿液检测取材方便、无创伤性、患者更容易接受。
　　 近年来通过检测尿液足细胞标记蛋白而评估肾小球损伤的报道日益增多，但无对方法学比较的研究报道，无一个成熟的可应用到常规检验的方法，本研究对同一标本分别用改良的免疫细胞化学染色和商品化的酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)两种方法同时检测肾小球疾病患者和健康对照者尿中的足细胞标记蛋白(podocalyxin，PCX)的表达，并将此两种方法与目前临床常用肾功能指标进行比较，以明确尿液足细胞检测是否可作为反映肾脏早期损伤的无创指标。
　　 研究方法:
　　 采用免疫细胞化学染色和ELISA对45例肾小球疾病患者（根据肾活检结果分为增生组包括IgA肾病11例和狼疮肾炎Ⅳ型6例;非增生组包括膜性肾病19例，微小病变性肾病6例，局灶性节段性肾小球硬化症2例和狼疮肾炎Ⅴ型1例）和20例健康对照者进行尿液足细胞标记蛋白podocalyxin(PCX)的检测，并与目前临床所用其它肾功能指标比较。
　　 实验结果:
　　 1、免疫细胞化学染色结果显示:除健康对照组和2例患者尿中未检出足细胞外，其它患者尿中均检测出足细胞;增生组的尿足细胞计数(个/20HP，20.35±17.47)高于非增生组（个/20HP，7.68±12.08）(P＜0.05)。
　　 2、酶联免疫吸附实验结果显示:病例组的PCX含量(7.41±1.75ng/ml)高于健康对照组(5.99±0.98ng/ml)(P＜0.01);增生组的PCX含量(8.39±1.92ng/ml)高于非增生组(6.81±1.34ng/ml)(P＜0.01)。
　　 3、相关性统计分析显示:免疫细胞化学染色结果中足细胞计数（个/20HP）与ELISA结果（Pearman相关系数r=0.899，P＜0.01）、胱抑素C(CysC)（r=0.878，P＜0.01）呈高度正相关，与BUN、CR、URIC和β2-MG不相关;ELISA结果与CysC（r=0.848，P＜0.01）呈高度正相关，与BUN、CR、URIC和β2-MG不相关。
　　 4、ROC曲线显示:染色法的AUC(曲线下面积)(0.978)大于ELISA(0.76)和CysC(0.89); ELISA的AUC与CysC无差异。
　　 结论:
　　 免疫细胞化学染色和ELISA均可通过检测尿中足细胞标记蛋白podocalyxin而反映肾小球损伤，免疫细胞化学染色法诊断价值较高于ELISA法和CysC。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

实验对象及分组

实验材料与方法

一、实验材料

二、实验方法

附：试剂配制方法

三、统计学分析

实验结果

讨论

结论

附录、附图表

参考文献

综述

致谢

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