HL-60细胞诱导分化后LMP/TAP的表达变化及其意义的研究

摘要

背景：肿瘤的免疫逃逸机制是目前肿瘤分子生物学研究的一个热点，已发现多种来源的肿瘤细胞不表达或低水平表达HLA-I类分子，从而逃脱机体的免疫监视。低分子量蛋白酶体(LMP)包括两个亚基LM2、LMP7，其作用在于能够水解肿瘤抗原成为合适的肽段。抗原处理相关转运体蛋白（TAP）由TAP1和TAP2组成，主要负责将胞浆内经蛋白酶体降解后产生的肽段转运到内质网腔中。这些肽段在内质网腔(ER)中与MHC-I类分子连接然后在细胞表面表达提呈，为CD8+T淋巴细胞所识别，从而引起特异性的细胞毒性T淋巴细胞反应(CTL)。TAP1、TAP2、LMP2和LMP7其中一个或两个亚基的缺失都会导致MHC-I类分子细胞表面表达的急剧下降。在LMP/TAP基因与肿瘤的关联研究中，许多学者对实体瘤LMP/TAP表达失衡与肿瘤的恶性程度、转移、存活相关性的研究进行了较为广泛的探讨，比如结肠癌、肺癌、肾细胞癌、食管癌、乳腺癌、原发性黑色素瘤等细胞系。这一系列研究揭示，这些细胞系的TAP或者LMP均有不同亚类及不同程度的表达缺陷，但LMP/TAP与血液系统恶性疾病相关性分析则偶有报导。
　　 目的：基于上述理论背景，本研究建立ATRA和PMA分别诱导急性早幼粒白血病细胞株HL-60细胞分化的模型，对LMP/TAP构成亚单位TAP1、TAP2、LMP2、LMP7在该细胞模型中的表达变化及其临床意义进行初步探讨，旨在了解LMP/TAP在急性白血病发病和预后中的作用，探索新的基因靶点，拟为白血病的免治疗开辟新的治疗道路。
　　 方法：取对数生长期的HL-60细胞，分别加入ATRA、PMA进行诱导分化，同时设有阴性对照组，于37℃、5％ CO2饱和湿度下培养72小时，Wright-Gimesa染色观察HL-60细胞形态，流式细胞术检测CD11b、CD14的表达，逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TAP1、TAP2、LMP2、LMP7基因的mRNA的表达，蛋白质印记(Western blot)检测细胞TAP2的蛋白表达。测定结果用(x)±s表示，均数比较采用f检验，以P＜0.05为有统计学差异。
　　 结果：0.8μM ATRA和50nM PMA分别作用HL-60细胞72小时后可显著抑制细胞增殖，并出现明显的分化现象，倒置显微镜下观察到细胞分别向成熟粒细胞及巨噬细胞方向分化。流式细胞术检测细胞表面标记:实验组的CD11b、CD14与对照组相比均有明显升高(P＜0.05)。RT-PCR检测诱导分化模型:TAP1、TAP2、LMP2、LMP7基因mRNA表达水平有显著升高(P＜0.05);Western blot检测TAP2蛋白表达水平有明显升高(P＜0.05)。
　　 结论：在ATRA、PMA诱导HL-60细胞分化的模型中TAP、LMP的表达水平与对照组相比有明显升高，提示髓系白血病细胞中存在TAP或LMP不同亚类及不同程度的表达缺陷;在ATRA、PMA诱导HL-60细胞分化的模型中LMP/TAP基因表达上调，提示白血病来源的单核样细胞具有一定的免疫功能表型。

目录

声明

摘要

主要符号表

前言

材料与方法

1．1 主要材料仪器

1．2 建立HL-60细胞诱导分化模型

1．3 Wright-Gimesa染色观察HL-60细胞分化

1．4 流式细胞仪检测CD11b／CD14的表达

1．5 RT-PCR检测HL-60细胞LMP／TAP mRNA的表达

1．6 Western blot分析TAP2的蛋白表达

1．7 统计学处理方法

结果

2．1 HL-60细胞分化指标的检测

2．2 ATRA／PMA诱导HL-60细胞诱导分化过程中LMP／TAP的表达水平升高

讨论

结论

附图

参考文献

综述

致谢

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