变应性鼻炎患者外周血iNOSmRNa-iNOS及NO定量检测在皮质类固醇激素治疗评价中的作用

摘要

[目的]
　　 本实验通过检测变应性鼻炎(allergic rhinitis，AR)患者局部应用皮质类固醇激素治疗前后外周血NO、iNOS及EOS的水平变化，并结合病人鼻黏膜及临床症状改善情况，寻找临床效果评价的方便、快速的试验指标，为变应性鼻炎的治疗和病情评估提供新的手段。
　　 [方法]
　　 1、实验对象与选择:变应性鼻炎病人组选择就诊我院门诊的变应性鼻炎患者59例，与组对象均符合中华医学会耳鼻喉科分会推荐的变应性鼻炎的诊断标准，且皮肤过敏原点刺试验均为阳性表现，取11例初诊及第四周复诊病人鼻黏膜。健康对照组为健康体检人员50例。10例正常鼻黏膜取自尸检。
　　 2、实验对象症状体征评价:确定随访时间为四周，每四周对复诊AR病人进行症状、体征评价，随访24周。
　　 3、实验方法:抽取初诊、复诊AR病人及健康体检人员的外周血，采用实时荧光定量多聚酶链反应(qRT-PCR)方法检测外周血白细胞iNOS mRNA水平变化，采用ELISA法检测血浆iNOS的水平变化，采用硝酸还原酶比色法测定血浆NO含量，并对外周血嗜酸粒细胞EOS进行常规计数。
　　 [结果]
　　 1.变应性鼻炎患者症状体征的变化:
　　 至第24周随访结束，8例退出实验。第4周末复诊，余51例中取得显著改善的病人34例，有效改善病人16例，无效者1例，显效率67％，有效率31％，总有效率达98％，第8周末复诊，无效病人联合应用抗组胺药物，症状体征得到满意改善;34例显效病人有2例病人复发，16例有效病人中有3例病人复发，对于复发的5例病人在接下来的治疗中给予皮质类固醇激素、抗组胺类药物联合治疗，其余病人症状体征较前有显著改善，评分较前降低，治疗同前;第12末复诊，32例显效病人和13例有效病人中均有2人症状复现，补加抗组胺类药物联合治疗，其余病人单用皮质类固醇药物，药量减半，用药至第16周末复诊;第16周末41例有效病人在所用药物减半后症状控制良好，无复发病例出现，其中联合用药病人10例，4例病人对药物疗效满意，6人不满意治疗效果，症状体征评分未见明显改善;第20周末复诊病人中未见有新复发病例出现;联合用药治疗效果满意者遵医嘱继续用药，不满意者放弃治疗;第24周末复诊病人未见有新复发病例出现。
　　 2、鼻黏膜HE染色结果:正常对照组黏膜上皮可见纤毛，间质可见少量腺体及淋巴细胞，偶见EOS（图5）。AR组黏膜上皮损伤、纤毛减少，表面有炎性渗出物;间质水肿、腺体增多可见大量EOS（图6）。AR病人治疗后黏膜上皮完整;间质水肿减轻、腺体减少;EOS明显减少（图7）。
　　 3、硝酸还原酶比色法检测变应性鼻炎及健康体检人员外周血NO水平:AR患者外周血NO水平为68.89±9.76(μmol/L)，健康体检人员外周血NO水平43.47±9.47(μmol/L); AR治疗组为55.62±9.89(μmol/L)，比治疗前明显降低。各组相比较，差异有统计学意义(p＜0.01)。
　　 4、ELISA法检测变应性鼻炎病人组治疗四周前、后与健康体检人员外周血相关因子含量，并对外周血EOS数目常规计数:
　　 4.1、外周血EOS计数
　　 变应性鼻炎患者治疗前外周血EOS数目均明显高于健康对照组，差异显著具有统计学意义(p＜0.01)，治疗后外周血EOS数目显著下降，显著高于健康对照组，差异具有统计学意义，(p＜0.05)，EOS数目治疗后与治疗前计数做统计学分析，无统计学意义(p＞0.05)。
　　 4.2、外周血iNOS
　　 变应性鼻炎患者治疗前外周血iNOS水平显著高于健康对照组，差异显著，具有统计学意义(p＜0.01);经局部皮质类激素治疗后外周血iNOS水平仍明显高于健康对照组，有统计学意义(p＜0.05)，变应性鼻炎患者治疗后外周血iNOS水平较前显著下降(p＜0.01)，差异具有统计学意义。
　　 5、实时荧光定量PCR法检测变应性鼻炎病人治疗四周前、后及健康对照组入组人员外周血白细胞iNOSmRNA:
　　 变应性鼻炎患者治疗4周前、后外周血白细胞iNOS mRNA表达量明显高于健康对照组(p＜0.05)，变应性鼻炎患者治疗前外周血白细胞iNOS mRNA表达量明显高于治疗后(p＜0.05)，有统计学意义。
　　 [结论]
　　 1.AR病人外周血iNOS-mRNA表达增加与外周血iNOS水平增加及NO水平增高与临床症状相关，提示该通路具有重要作用。
　　 2.鼻用皮质类固醇激素可降低AR患者外周血NO、iNOS水平，降低EOS数目，显著改善临床症状;随访提示规律用药，复发率低。
　　 3.检测变应性鼻炎患者外周血NO、iNOS、iNOS mRNA及EOS可协助评价变应性鼻炎治疗效果，其中实时荧光定量PCR是可靠的、方便快速的实验室检测方法。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

材料与方法

1．临床实验分组

2 皮肤过敏原点刺试验步骤

3 详细记录复诊病人症状体征变化及评分情况，直至第24周随访工作结束

4 实验室所要检测指标

5．统计分析

实验结果

1．变应性鼻炎患者症状体征变化

2．AR治疗前后以及健康组鼻黏膜变化

3．AR治疗前后以及健康对照组外周血EOS数目变化

4．AR治疗前后以及健康对照组血浆NO、iNOS水平

5．AR治疗前后以及健康对照组外周血白细胞iNOS mRNA水平

讨论

1．特异性免疫球蛋白IgE的变化

2．与变应性鼻炎病人临床症状密切相关的嗜酸粒细胞在病人鼻黏膜中持续增多的机制

3．局部症状加重的原因

结论

附表

附图

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表及待发表学术论文