氯通道Icl,acid对强酸引发的自发性高血压大鼠胸主动脉收缩的抑制及机制

摘要

背景：
　　 细胞外pH(pH0)通常被维持在7.35-7.45这一狭窄的范围内，但在某些病理情况下，如缺血缺氧、代谢紊乱、胃肠道功能失调以及肾功能不全，局部甚至整个机体的细胞外酸中毒便可能发生。细胞外酸中毒能够调节血管张力，如对静息状态动脉血管的收缩效应、对去甲肾上腺素预收缩的动脉血管的舒张效应，而pH0降低程度的不同则可能导致了这种作用差异的产生。此外，pH0对罹患高血压个体和正常个体的动脉血管张力调节作用亦具有一定差异。
　　 新近研究发现，在多种哺乳动物细胞上，如HEK-293细胞、心肌细胞、单核细胞，存在一种可被严重酸性pH0激活的新型氯通道(severeacidicpHactivatedchloridechannel，Icl，acid)。Icl，acid通常被细胞外严重酸性环境所激活（pH0低于5.5），具有电压依赖性、强烈外向整流、可被阴离子通道阻断剂4，4’-diisothiocyanostilbene-2，2’-disulphonicacid(DIDS)所阻断的特点。而Icl，acid是否参与了严重酸性pH0对动脉血管张力的调节，以及是否在高血压的发生发展中具有重要作用尚未可知。
　　 目的：
　　 1.观察自发性高血压大鼠离体胸主动脉血管环在不同酸性pH0条件下产生的张力变化;
　　 2.探讨钙离子和Icl,acid在轻度和严重酸性pH0引发的自发性高血压大鼠离体胸主动脉血管环张力变化中的作用;
　　 3.探讨自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞在严重酸性pH0条件下Icl,acid氯电流的变化情况。
　　 方法：
　　 12-13周龄雄性自发性高血压大鼠(spontaneouslyhypertensiverat，SHR)6只，正常对照组血压正常的同周龄雄性Wistar大鼠6只。离体血管实验技术检测SHR和Wistar大鼠离体胸主动脉血管环在正常和不同酸性pH0条件下（pH0=7.4，6.4，5.4和4.4）静息张力的变化，以及分别使用氯通道阻断剂DIDS(10-4M)、5-nitro-2-(3-phenylpropylamino)benzoicacid(NPPB,10-4M)和电压依赖性钙通道(VDCC)阻断剂硝苯地平（10-5M）预孵育或使用无钙生理盐溶液（无钙PSS液）对这种变化的影响。全细胞膜片钳技术检测SHR和Wistar大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞在正常和严重酸性pH0条件下(pH0=7.4和4.4)电流密度变化情况以及氯通道阻断剂DIDS(10-4M)和NPPB(10-4M)对这种变化的影响。
　　 结果：
　　 1.pH0降低对SHR和Wistar大鼠离体胸主动脉血管环静息张力的影响
　　 pH0降低可引起SHR和Wistar大鼠离体胸主动脉血管环静息张力显著升高，Wistar大鼠的血管环收缩效应在pH06.4，pH05.4和pH04.4间的差异无显著性(P＞0.05)，SHR的血管环收缩效应在pH05.4和pH04.4间的差异无显著性(P＞0.05)。与Wistar大鼠相比，SHR血管环张力的升高更加显著(P＜0.05)。内皮完整和去内皮的血管环间张力升高程度的差异无显著性(P＞0.05)。
　　 2.无钙PSS液和VDCC阻断剂硝苯地平预孵育对pH0降低引发的SHR和Wistar大鼠离体胸主动脉血管环收缩效应的影响
　　 在无钙PSS液中，pH0降低引发的SHR和Wistar大鼠离体胸主动脉的血管环收缩效应较含钙液中明显下降。硝苯地平显著抑制pH0降低引发的SHR和Wistar大鼠离体胸主动脉血管环的收缩效应，剩余血管环收缩效应在pH05.4显著高于pH06.4和pH04.4(P＜0.05)。与Wistar大鼠相比，SHR的剩余血管环收缩效应显著升高(P＜0.05)。
　　 3.氯通道阻断剂DIDS和NPPB预孵育对pH0降低引发的SHR和Wistar大鼠离体胸主动脉血管环收缩效应的影响
　　 DIDS和NPPB均显著抑制pH0降低引发的SHR和Wistar大鼠离体胸主动脉血管环的收缩效应，剩余血管环收缩效应在pH04.4显著高于pH06.4和pH05.4(P＜0.05)。与Wistar大鼠相比，SHR的剩余血管环收缩效应显著升高(P＜0.05)。
　　 4.严重酸性pH0对SHR和Wistar大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞Icl,acid氯电流的影响
　　 在pH04.4条件下，全细胞膜片钳在SHR和Wistar大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞膜上均记录到一种外向电流，具有强烈外向整流的特征，并可被氯通道阻断剂DIDS和NPPB显著抑制，提示记录电流为Icl,acid氯电流。与Wistar大鼠相比，SHR的Icl,acid氯电流密度显著下降(P＜0.05)。
　　 结论：
　　 1.pH0降低可引发SHR和Wistar大鼠离体胸主动脉血管环静息张力的升高;
　　 2.外钙内流和内钙释放均参与pH0降低引发的SHR和Wistar大鼠离体胸主动脉血管环的收缩效应;
　　 3.Icl,acid的激活可抑制严重酸性pH0引发的SHR和Wistar大鼠离体胸主动脉血管环的收缩效应;
　　 4.SHR离体胸主动脉血管环对pH0降低的收缩更强烈，Icl，acid的激活对SHR血管环收缩效应的抑制作用明显减弱。

目录

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摘要

符号说明

前言

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

创新点

限制性

4 结论

附表

附图

参考文献

致谢

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