Sonic hedgehog信号通路在脂多糖所致小鼠急性肺损伤中的表达变化及意义

摘要

目的：探讨Sonic hedgehog(SHH)信号通路中的相关分子SHH、PTC、GLI1在脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）所致的小鼠急性肺损伤（acute lung jinjury, ALI）中的表达变化及意义，为临床上急性肺损伤的治疗提供新的思路。
　　方法：选择5～7周龄、体质量20～25g的雄性BALB/c小鼠作为实验动物，并随机分为对照组（腹腔注射等量生理盐水）、LPS处理组（5mg/kg LPS腹腔注射）、环巴胺处理组（5mg/kg LPS腹腔注射后30min腹腔注射环巴胺50mg/kg）。分别于给药后6h、12h、24h，戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后留取标本，肉眼观察肺组织大体改变，4％多聚甲醛固定后切片并HE染色观察肺组织病理学改变，并做出病理损伤评分;取一肺叶60℃48h烘干后，测定肺组织湿干质量比值(wet mass/dry mass，W/D);荧光实时定量PCR检测不同处理组肺组织肿瘤坏死因子-α(tumer necrosisfactor-alpha，TNF-α)、SHH、PTC及下游转录因子GLI1的mRNA表达;Western blot检测各处理组肺组织核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)、SHH和GLI1的蛋白表达情况。
　　结果：对照组肺组织光镜下可见肺泡腔清晰、无明显炎性细胞浸润，病理损伤评分很低;LPS处理组肺组织肺泡充血水肿、肺泡隔明显增厚，肺间质广泛炎性细胞浸润，肺组织病理损伤评分明显高于对照组(P＜0.01);环巴胺处理组肺泡腔大范围消失、肺组织大片实变、弥漫炎性细胞浸润，各时间点肺组织病理损伤评分均较LPS处理组高(P＜0.05)。对照组在各时间点的W/D均较低，LPS处理组各时间点的W/D均较对照组高（6h、12h时P＜0.01，24h时P＜0.05），而环巴胺处理组的W/D在各时间点均高于LPS处理组(P＜0.05)。对照组TNF-α mRNA的表达在各时间点均较低，LPS处理组TNF-α mRNA的表达在各时间点均明显高于对照组(P＜0.01)，环巴胺处理组在12h、24h时TNF-α mRNA的表达较LPS处理组高(P＜0.05)。对照组NF-κB蛋白的表达很低，LPS处理组NF-κB的蛋白表达明显高于对照组(6h、12h，P＜0.01;24h，P＜0.05)，而环巴胺处理组NF-κB的蛋白表达较LPS处理组更高(P＜0.01)。对照组SHH、PTC、GLI1的mRNA表达水平均较低。LPS处理组在6h时SHH、PTC、GLI1的mRNA表达水平与对照组无明显差异(P＞0.05)，而在12h、24h时SHH、PTC、GLI1的mRNA表达均明显高于对照组(P＜0.01)，且与时间呈正相关(P＜0.01)。环巴胺处理组在6h时SHH、PTC、GLI1的mRNA表达与LPS处理组相比无明显差异(P＞0.05)，12h时SHH、PTC、GLI1的mRNA表达均较LPS处理组降低(P＜0.05)，24h时其表达较LPS处理组明显下降(SHH P＜0.01，PTC P＜0.05，GLI1 P＜0.01)。对照组各时间点的SHH、GLI1蛋白表达均较低。与对照组相比，LPS处理组在6h、12h、24 h的SHH、GLI1蛋白表达水平均明显升高(SHH6h P＜0.05，12h、24h P＜0.01;GLI1各时间点P＜0.01)，且与时间呈正相关(P＜0.01)。环巴胺处理组SHH、GLI1的蛋白表达水平均较LPS处理组降低(SHH P＜0.01，GLI1 P＜0.05)。
　　结论：⑴对照组SHH、PTC、GLI1的mRNA表达及SHH、GLI1的蛋白表达量均很低，SHH信号通路处于抑制状态，而LPS处理后12h、24h时SHH、PTC、GLI1的mRNA表达量及6h、12h、24h时SHH、GLI1的蛋白表达量均明显高于对照组，提示在LPS所致的急性肺损伤中存在SHH信号通路的激活，表达量明显增加。⑵给予SHH信号通路的抑制剂环巴胺干预后，12h、24h时SHH、PTC、GLI1的mRNA表达量及SHH、GLI1的蛋白表达量均较单独LPS处理组下降，提示SHH信号通路的表达受到抑制，而此时，环巴胺处理组的肺组织病理损伤评分、W/D、TNF-αmRNA和NF-κB蛋白的表达却较单独LPS处理SHH信号通路激活时更高，即SHH信号通路受抑制时的肺组织损伤程度较SHH信号通路激活时重，说明SHH信号通路受抑制可加重肺组织的损伤程度，提示SHH信号通路的激活可减轻肺组织损伤、参与肺组织损伤后修复过程。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

材料与方法

1．材料

2．方法

3 数据处理及统计分析

结果

1 肺组织病理改变

2 肺组织W／D变化

3 肺组织TNF-α mRNA表达水平

4 SHH信号通路中SHH、PTC、GLI1 mRNA的表达水平

5 肺组织NF-κB的蛋白表达水平

6 SHH信号通路中SHH、GLI1的蛋白表达水平

讨论

结论

创新点

参考文献

综述 Sonic hedgehog信号通路在肺脏发育及相关肺疾病中的表达

致谢

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