CCL25/CCR9在大鼠心脏移植慢性排斥反应中的表达及意义

摘要

目的:近年来，随着脑死亡患者心脏供体分配制度的建立和机械辅助循环的出现，限制心脏移植手术发展的供体短缺问题得到缓解，人们再次把目光聚焦于如何进一步提高心脏移植患者的远期存活率。其中，移植心脏慢性排斥反应，即心脏移植物血管病和心肌纤维化是影响移植心脏长期存活的主要原因。研究表明，多种趋化因子与其受体在器官移植术后的排斥反应中起着重要作用，针对它们的结合进行靶向阻断从而延缓移植器官慢性排斥反应成为当前的研究热点。趋化因子CCL25是新近发现的趋化因子CC亚家族成员，主要表达在胸腺和小肠上皮，对表达其特异性受体CCR9的炎性细胞有促进增殖和趋化的作用。目前，国内外对CCL25/CCR9的研究多集中在类风湿性关节炎、炎症性肠病、肝炎、肿瘤等领域，鲜见在心脏移植慢性排斥反应中的报道。本实验通过采用anti-CCL25中和抗体靶向性阻断CCL25与CCR9的结合，并检测CCL25和CCR9在移植心脏中的表达情况，探讨CCL25/CCR9与心脏移植慢性排斥反应的关系，为心脏移植慢性排斥反应的治疗提供依据。
　　方法:选取近交系Wistar大鼠为供者，SD大鼠为受者，采用“套管连接技术”行颈部心脏异位移植术。将受者随机分为三组，每组10只。CsA组:移植术后当日腹腔内注射CsA，10mg/kg，隔天1次，共10次。CsA+IgG组:CsA应用同CsA组，同时注射IgG抗体，0.1mg/kg，隔天1次，共10次。CsA+anti-CCL25组:CsA应用亦同CsA组，同时注射anti-CCL25中和抗体，0.1 mg/kg，隔天1次，共10次。术后每天对受者颈部的移植心脏进行视诊，并触诊其跳动力度，明确移植心脏的存活情况。于术后70d收获移植心脏，制备石蜡切片，行HE、Van Gieson和天狼星红染色观察各组移植心脏的病理学改变，行免疫组化、Western blotting检测分析CCL25和CCR9的表达水平。
　　结果:HE和Van Gieson染色可见:CsA组和CsA+IgG组的移植心脏较多心肌细胞出现变性坏死，冠状动脉管腔狭窄，个别甚至闭塞，大量炎性细胞浸润，以心外膜下的血管周围相对偏多，CsA+anti-CCL25组病理改变较CsA组和CsA+IgG组明显减轻（P＜0.05）。天狼星红染色示:CsA组和CsA+IgG组心肌间质内胶原纤维弥漫性增生，表现为深染的致密纤维束，CsA+anti-CCL25组胶原纤维呈疏松网状分布，纤维化程度较前两组明显减轻(P＜0.05）。免疫组化切片显示CCL25和CCR9蛋白在三组大鼠移植心脏中均呈阳性表达。Western blotting检测三组CCL25及CCR9蛋白的表达水平与免疫组化检测结果一致，CsA+ anti-CCL25组CCL25和CCR9蛋白的表达强度均明显低于CsA组和CsA+IgG组（P＜0.05）。
　　结论:CCL25和CCR9在大鼠心脏移植慢性排斥反应中均有表达，两者表达水平均与移植排斥反应程度成正相关，anti-CCL25中和抗体靶向性阻断CCL25/CCR9可减轻移植心脏的慢性排斥反应，表明CCL25/CCR9在大鼠心脏移植慢性排斥反应中具有重要作用。

目录

声明

摘要

主要中英文缩略词表

前言

材料与方法

1．实验材料

2．实验方法

3．统计学处理

结果

1．心脏移植术后受者大鼠的一般情况

2．HE染色观察移植心脏的组织病理学改变

3．Van Gieson染色观察CAV程度

4．天狼星红染色观察心肌组织的纤维化程度

5．免疫组织化学染色法检测各组移植心脏中目的蛋白的表达

6．Western blotting检测各组移植心脏组织中目的蛋白的表达水平

讨论

1．心脏移植

2．心脏移植慢性排斥反应

3．趋化因子及其受体与移植排斥反应

4．CCL25／CCR9与移植排斥反应

5．展望生物靶向治疗

6．创新性与局限性

结论

附图及附表

参考文献

致谢

攻读学位期间发表的学术论文