长链非编码RNA MEG3在胃癌中的表达及其影响细胞周期的作用机制研究

摘要

目的:
　　探讨非编码RNA MEG3(lncRNA-MEG3)在胃癌组织中的表达变化并评价其表达水平与胃癌患者临床病理参数之间的关系，进一步采用体外实验研究lncRNA-MEG3对胃癌细胞系细胞周期的影响并初步探索其作用机制。
　　方法:
　　1:利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测lncRNA-MEG3及P53 mRNA在胃癌患者癌组织及癌旁组织的表达水平，并搜集胃癌患者临床资料，分析lncRNA-MEG3的表达水平与胃癌患者临床病理参数之间的关系。同时检测P53mRNA在胃癌及癌旁组织的表达水平观察其表达变化。
　　2:使用qRT-PCR技术检测lncRNA-MEG3及P53 mRNA在不同分化程度胃癌细胞系SGC7901、BGC823、AGS、N87及正常胃粘膜上皮细胞系GES1的表达情况。
　　3:采用脂质体2000将含pCDNA-MEG3质粒及空白质粒（做为阴性对照）瞬时转染进入BGC823细胞系中，根据GFP荧光蛋白在荧光显微镜下观察转染效率并用qRT-PCR技术检测lncRNA-MEG3的表达变化确定转染成功，使用PI染料及流式细胞仪技术检测细胞周期，分析阳性组、阴性组及空白组之间有无统计学差异。
　　4:采用生物信息学技术和lncRNA基因库预测lncRNA-MEG3的下游调控蛋白为P53，使用蛋白印迹(western blot)技术检测转染阳性组、阴性组及空白组的P53蛋白表达水平有无变化，初步探索lncRNA-MEG3对细胞周期产生影响的作用机制。
　　结果:
　　1:qRT-PCR结果显示，相比于胃癌患者的癌旁组织，lncRNA-MEG3在胃癌组织中的表达水平明显降低（P＜0.01）且lncRNA-MEG3的表达水平与临床患者是否出现远处转移明显相关(P＜0.05)，与年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度、局部淋巴结转移、TNM分期及肿瘤分化程度等无显著相关性。同时发现P53 mRNA在胃癌组织中的表达量也发生了明显下调（P＜0.05）
　　2:lncRNA-MEG3在胃癌细胞系SGC7901、BGC823、AGS、N87中的表达水平明显低于正常胃粘膜上皮细胞系GES1中lncRNA-MEG3的表达水平，差别具有统计学意义(P＜0.05)。
　　3:瞬时转染pCDNA-MEG3质粒及空白质粒后，实验证明pCDNA-MEG3质粒组即阳性组细胞的细胞周期明显表现出G1期阻滞，而阴性对照组与空白组之间并未表现出明显差异。说明高表达的lncRNA-MEG3可以引起细胞阻滞于G1期进而影响细胞的增殖能力。
　　4:Western blot实验结果显示，与对照组相比，转染pCDNA-MEG3的胃癌细胞BGC823的P53表达量明显增加，说明lncRNA-MEG3可以通过影响P53的表达进而调控细胞周期的变化。
　　结论:
　　1:lncRNA-MEG3在胃癌组织中低表达，并与胃癌患者是否出现远处转移明显相关，提示lncRNA-MEG3可能在胃癌的发生发展中发挥关键作用;
　　2:lncRNA-MEG3可以通过上调P53的表达水平进而影响胃癌细胞的细胞周期，造成其G1期阻滞，影响胃癌进展，对于寻找胃癌新的治疗靶点具有重要意义。

目录

声明

摘要

英文缩略索引

前言

材料与方法

1．实验材料

2．实验方法

结果

1：qRT-PCR结果验证

2：lncRNA-MEG3在胃癌组织中表达变化

3：lncRNA-MEG3表达水平与胃癌患者临床病理参数之间的相互关系

4．lncRNA-MEG3及P53在胃癌细胞系及正常胃粘膜细胞系中的表达

5．lncRNA-MEG3转染效率的检测

6．lncRNA-MEG3可以在转录后水平上调P53蛋白的表达

7．lncRNA-MEG3的表达增加可以引起G1期阻滞

讨论

结论

附录

参考文献

致谢

攻读学位期间取得的研究成果