双酚A对F344大鼠甲状腺组织雌激素受体α表达的影响

摘要

甲状腺癌是内分泌系统中最常见的恶性肿瘤。甲状腺局部乳头状增生以及C细胞增生等局部增生性病变具有转化为良、恶性肿瘤的潜能，在甲状腺细胞异常增殖中十分常见。近年来，甲状腺乳头状癌（Papillary thyroid carcinoma，PTC）发病率在世界范围内呈上升趋势，部分碘过量地区PTC发病率增高。育龄期人群PTC患病率的女性与男性之比为3～5∶1。乳腺癌患者伴发甲状腺癌的概率明显增高。乳腺癌的发生与雌激素和雌激素受体α（Estrogen receptorα，ERα）密切相关。细胞学实验发现，甲状腺肿瘤细胞的增殖与ERα也具有密切联系。环境内分泌干扰物双酚A(Bisphenol A，BPA)是一种雌激素类似物，可作用于ERα，导致乳腺、卵巢等器官组织的增生性病变甚至癌变。但BPA如何影响甲状腺增生性病变的发生以及与甲状腺ERα表达的关系尚不明确。我们前期体外研究发现10-8～10-6mmol/L BPA可显著促进人PTC细胞增殖;前期动物实验表明，在碘过量基础上，BPA250组F344大鼠甲状腺肿瘤发病率最高，BPA1000组甲状腺肿瘤恶性度最高。
　　目的：
　　在碘过量基础上，研究BPA对F344大鼠甲状腺局部增生性病变发生的影响以及对甲状腺组织ERα表达的影响，探讨BPA促进甲状腺组织增生的部分作用机制，为甲状腺肿瘤的预防以及BPA相关产品的合理使用提供一定的科学依据。
　　方法：
　　4周龄雌性F344大鼠，按2800mg/kg体质量一次性皮下注射致癌药物N-亚硝基二异丙醇胺(N-Bis(2-hydroxypropyl) nitrosamine，DHPN)。将大鼠随机分为对照组、碘化钾(Potassium iodide，KI)1000μg/L组（KI组）、BPA250μg/kg+KI1000μg/L组（BPA250+KI组）和BPA1000μg/kg+KI1000μg/L组(BPA1000+KI组)，共4组，每组10只。64周后，测定KI组和对照组24h尿碘浓度，统计各组甲状腺局部增生性病变的病理类型和发生率，检测ERα的免疫学表达和蛋白表达量，分析ERα和增殖指标PCNA的表达相关性及表达定位，测定血清雌二醇(Estradiol，E2)浓度。计量资料以(x)±s表示，组间比较方差齐时采用单因素方差分析，两两比较采用LSD检验或t检验，方差不齐时采用非参数检验。计数资料分析采用Fisher确切概率法。大鼠甲状腺ERα与PCNA免疫学表达相关性及血清E2浓度与甲状腺ERα免疫学表达相关性采用Spearman相关性分析。P＜0.05为差异具有统计学意义。
　　结果：
　　1.大鼠24h尿碘浓度
　　KI组大鼠24h尿碘中位数（Median of urinary iodine，MUI）(320.36μg/L)达到碘过量标准，与对照组(88.21μg/L)相比差异具有统计学意义(P＜0.01)。KI组24h尿碘平均值(311.84±19.22μg/L)与对照组（90.50±18.83μg/L）相比具有显著性差异(P＜0.001)。
　　2.大鼠甲状腺局部增生性病变病理类型
　　各组均出现不同程度局部增生性病变，包括C细胞增生和局部乳头状增生，其中局部乳头状增生又分为3级。
　　本实验中，对照组出现2例局部增生性病变，均为Ⅰ级乳头;KI组出现7例，包括1例C细胞增生，3例Ⅰ级乳头，2例Ⅱ级乳头和1例Ⅲ级乳头;BPA250+KI组出现3例局部增生性病变，分别为2例Ⅱ级乳头和1例Ⅲ级乳头;BPA1000+KI组出现8例局部增生性病变，分别为1例C细胞增生合并Ⅰ级乳头，3例Ⅰ级乳头，2例Ⅱ级乳头和2例Ⅲ级乳头。
　　3.大鼠甲状腺增生性病变发生率
　　3.1局部增生性病变发生率组间相比有显著性差异(P＜0.05)。BPA1000+KI组局部增生性病变发生率最高(80.00％)，对照组最低(22.22％)，两两相比无显著差异。
　　3.2增生性病变（含肿瘤及局部增生性病变）总体发生率组间相比差异有统计学意义(P＜0.05)。两两比较，BPA1000+KI组(100％)较对照组(33.33％)显著增高（P＜0.01）。
　　4.大鼠甲状腺ERα免疫组化结果
　　4.1大鼠甲状腺ERα免疫组化阳性率组间相比差异无统计学意义(P＞0.05)。阳性率最高者为BPA1000+KI组和BPA250+KI组(均为88.89％)，对照组阳性率最低(42.86％)。
　　4.2大鼠甲状腺ERα免疫组化评分组间相比具有统计学差异(P＜0.05)。两两比较发现，BPA1000+KI组评分最高，其次是BPA250+KI组，均较对照组明显增高（P＜0.01;P＜0.05）。此外，BPA1000+KI组ERα评分较KI组显著增高(P＜0.05)。
　　5.大鼠甲状腺ERα蛋白Western blot结果
　　组间相比有统计学差异(P＜0.01)。BPA1000+KI组ERα表达水平最高，其次为BPA250+KI组，该两组与对照组相比均有显著性增高(P＜0.01;P＜0.01)。KI组ERα表达水平与对照组无明显差别（P＞0.05）。BPA1000+KI组及BPA250+KI组与KI组相比均显著升高(P＜0.01; P＜0.05)。
　　6.大鼠甲状腺ERα及PCNA免疫学表达的相关性
　　Spearman相关性分析显示，两者在甲状腺的免疫学表达呈正相关关系且具有统计学意义（n=27,r=0.504,P=0.004）（忽略分组影响）。
　　7.大鼠甲状腺ERα及PCNA的免疫学表达定位
　　7.1 ERα及PCNA在甲状腺增生性病变中的表达定位ERα在甲状腺肿瘤和局部增生性病变中均可阳性表达。当病变部位ERα阳性时，周围正常甲状腺组织ERα表达量呈弱阳性或阴性表达。在高度恶性的MTC和ATC中，ERα呈弥漫性阳性表达。PCNA表达部位与ERα基本一致。
　　7.2 ERα及PCNA在正常甲状腺组织中的表达定位在正常甲状腺滤泡组织中，ERα与PCNA均主要分布于立方样或高柱状滤泡细胞，同时伴有滤泡腔直径较小及腔内胶质含量稀薄。在周边相对扁平、较大直径滤泡腔和含有丰富胶质的甲状腺细胞，ERα及PCNA分布减少。
　　8.大鼠血清E2浓度与甲状腺ERα表达的相关性
　　四组血清E2浓度组间相比无显著性差异(P＞0.05)。Spearman相关性分析显示，大鼠血清E2浓度与相应甲状腺ERα免疫组化评分之间无显著相关性(n=22,r=0.013,P=0.956)（忽略分组）。
　　结论：
　　1.在DHPN基础上，碘过量未能显著升高F344大鼠甲状腺增生性病变的发生率。
　　2.在DHPN及碘过量基础上，BPA1000可显著升高F344大鼠甲状腺增生性病变发生率。
　　3.一定浓度的BPA可上调F344大鼠甲状腺组织ERα的表达。
　　4.甲状腺组织ERα表达上调可能与甲状腺增生性病变的发生具有相关性。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

材料与方法

1．实验材料

2．实验方法

结果

1．尿碘浓度

2．大鼠甲状腺局部增生性病变病理类型

3．大鼠甲状腺增生性病变发生率

4．大鼠甲状腺ERα免疫组化结果

5．大鼠甲状腺ERα蛋白Western blot结果

6．大鼠甲状腺ERα及PCNA免疫学表达的相关性

7．大鼠甲状腺ERα及PCNA的免疫学表达定位

8．大鼠血清E2浓度与甲状腺ERα表达的相关性

讨论

1．甲状腺肿瘤

2．碘过量

3．ERα与甲状腺

4．BPA

5．本实验研究结果

6．创新性与局限性

结论

附图

附表

参考文献

致谢

攻读硕士学位论文期间的学术成果