长链非编码RNA BCYRN1在胃癌中发挥的生物学功能及临床应用研究

摘要

第一部分长链非编码RNA BCYRN1在胃癌组织中的表达情况及生物学功能研究
　　目的:
　　检测胃癌组织中lncRNA BCYRN1表达情况，并分析其与胃癌患者临床病理参数之间的关系;体外调控BCYRN1基因的表达水平，进行相关细胞功能实验，寻找下游靶基因，探究BCYRN1在胃癌中发挥的生物学功能和调控机制。
　　方法:
　　1.采用实时荧光定量聚合酶链反应方法(qRT-PCR)检测lncRNABCYRN1在56例胃癌患者癌组织及癌旁组织中的表达水平，收集患者临床病理资料，分析BCYRN1表达水平与患者临床病理参数之间的关系。2.采用脂质体2000将含BCYRN1的质粒和空白质粒转染到BGC-823和SGC-7901细胞，将si-BCYRN1或si-NC转染到AGS细胞中。采用qRT-PCR方法检测转染效率;采用CCK-8、细胞平板克隆形成实验、transwell实验以及流式细胞术检测细胞周期和凋亡，检测细胞增殖、迁移、凋亡等情况的变化。3.用qRT-PCR检测胃癌患者癌组织中EpCAM的表达水平，分析与BCYRN1表达之间的相关性;过表达或低表达BCYRN1后，检测EpCAM的mRNA和蛋白质的含量变化。
　　结果:
　　1.lncRNA BCYRN1在胃癌癌组织中表达量高于癌旁组织(P＜0.0001)，其表达水平与肿瘤的TNM分期有关，与年龄、性别、肿瘤大小、远处转移等其他临床病理参数无关。2.在BGC-823和SGC-7901中，转染pcDNA-BCYRN1组比转染empty vector组的BCYRN1表达量明显升高（P均＜0.0001）;在AGS细胞系中，转染si-BCYRN1组比si-NC组的BCYRN1表达量显著降低(P＜0.01);CCK-8结果显示，与阴性对照组相比，过表达了BCYRN1的细胞在检测的48小时、72小时增殖速度明显增加（P均＜0.05）;在进行低表达的细胞中，si-BCYRN1组其增殖速度在检测的第48、72小时较对照组有明显降低(P均＜0.05);过表达BCYRN1的细胞形成的克隆数多于阴性对照组（BGC-823细胞中P＜0.01，SGC-7901细胞中P＜0.05），低表达目的基因的AGS细胞形成的克隆数目少于阴性对照组(P＜0.01);过表达BCYRN1的细胞其细胞周期G1/G0期出现明显的降低(BGC-823:P＜0.001，SGC-7901:P＜0.01)，S期和G2/M期显著增加(BGC-823:P＜0.01，SGC-7901:P＜0.05)，在AGS细胞中，BC YRN1的低表达引起了G2/M期的显著降低(P＜0.0001)和G1/G0期的增加（P＜0.01）;高表达了BCYRN1的细胞在经历了无血清处理后其早期凋亡的细胞少于对照组(BGC-823:P＜0.001，SGC-7901: P＜0.01)，干扰BCYRN1表达后，早期凋亡的AGS细胞比对照组有所增加(P＜0.01);在Transwell实验中，高表达了BCYRN1的细胞穿膜细胞数高于阴性组（P均＜0.05）;抑制BCYRN1表达穿膜细胞数低于阴性对照(P＜0.01)。差异均有统计学意义。3.BCYRN1和EpCAM在胃癌癌组织中的表达呈正相关（r=0.468，P＜0.01）。在上调了BCYRN1的BGC-823及SGC-7901两种细胞中EpCAM的mRNA表达水平均显著增高，抑制BCYRN1表达的AGS细胞中EpCAM的mRNA明显降低;western blot实验提示蛋白变化与mRNA的变化趋势一致。
　　结论:
　　lncRNA BCYRN1在胃癌中高表达，有促进细胞增殖、迁移，增强细胞耐缺血清环境的能力，同时可调节EpCAM的表达，在胃癌中发挥癌基因的作用。
　　第二部分血清长链非编码RNA BCYRN1的检测及其对胃癌诊断和预后价值的评估
　　目的:
　　检测胃癌患者血清中长链非编码RNA（lncRNA）BCYRN1表达水平，分析其与患者临床特征的关系，探讨其在胃癌诊断中的价值。
　　方法:
　　1.采用病例对照研究方法。采用qRT-PCR对2014年11月至2015年7月山东大学齐鲁医院收治的124例胃癌患者、41例萎缩型胃炎患者、59名健康体检者血清中的lncRNA BCYRN1的表达水平进行检测。
　　2.采用电化学发光免疫分析法检测血清中癌胚抗原(CEA)、糖类抗原72-4(CA72-4)。
　　3.对31例成功接受胃癌根治术的患者手术前及术后3、7、10、30、100 d血清lncRNA BCYRN1水平进行动态监测。
　　4.应用ROC曲线分析lncRNA BCYRN1、CEA及CA72-4诊断胃癌的敏感度和特异度。两组间比较采用Mann-Whitney U检验，多组间比较采用Kruskal-WallisH检验。
　　结果:
　　1.胃癌患者血清BCYRN1表达水平Ⅰ+Ⅱ期组[1.041(0.794，1.462)]及Ⅲ+Ⅳ期组[1.290(0.978，1.794)]较癌前病变组[0.969(0.699，1.219)]、健康对照组[0.801(0.556，1.599)]有明显升高(H=54.68，P＜0.0001)。
　　2.与术前[1.120(0.859，1.663)]相比，胃癌患者血清lncRNA BCYRN1表达水平在术后10 d[0.903(0.724，1.182)](U=55.0，P＜0.0001)、30 d[0.759(0.671，1.037)](U=299.0, P=0.0261)、100 d[0.478(0.378,0.635)](U=41.0, P＜0.0001)均有显著降低。
　　3.血清lncRNA BCYRN1诊断胃癌的曲线下面积(AUC)为0.865，高于CA72-4(AUC=0.699)及CEA(AUC=0.807)。三者联合检测AUC为0.934。
　　结论:
　　胃癌患者血清中lncRNA BCYRN1表达水平明显升高，lncRNABCYRN1有望作为胃癌诊断及疗效监测的潜在生物标志物。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

第—部分 长链非编码RNA BCYRN1在胃癌组织中表达的临床意义及生物学功能研究

材料与方法

结果

讨论

附图表

第二部分 血清长链非编码RNA BCYRN1的检测及其对胃癌诊断和预后价值的评估

材料与方法

结果

讨论

附图表

参考文献

致谢

攻读学位期间发表的学术论文目录