荧光衍生试剂的设计制备及在反相高效液相色谱—质谱分析中的应用

摘要

反相高效液相色谱（RP—HPLC）因其强大的分离分析能力被广泛应用于许多研究和应用领域如分析化学、生物化学、临床医学、药物化学、食品卫生和环境监测等。其超强的分离能力使之成为诸多领域积极采纳的分析手段之一，并成为分析化学中发展最快、应用广泛的研究领域之一。然而，对于反相液相色谱的并没有合适的高灵敏的通用检测器，研究人员一直采用化学衍生化来提高分析物检测灵敏度，同时能够改善分离。新型衍生化试剂的开发和新型衍生化试剂在高效液相色谱中的应用研究一直是色谱领域中最为活跃的研究方向之一。本论文重点研究了几种新荧光衍生试剂的设计合成和表征，考察了试剂的光谱性质，优化了衍生反应条件、色谱分离条件，建立相应的反相高效液相色谱分析方法，并应用于多种有意义的实际样品的分析中。具体工作内容如下： 第一章：简述了高效液相色谱和高液相色谱质谱联用研究进展。介绍了化学衍生化，荧光衍生化及其最新研究进展。最后概述了柱前衍生高效液相色谱分析的应用进展，以及计算机辅助方法建立在柱前衍生高效液相色谱方法建立中的意义和研究进展。 第二章：总结了荧光衍生试剂的设计思路，进行了荧光衍生试剂：10—乙基吖啶酮—2—磺酰氯（EASC）、10—乙基吖啶酮—2—磺酰肼（EASH）等吖啶酮磺酰氯类荧光衍生试剂的设计合成和表征、5—（2—羟乙基）苯并[b]吖啶酮（HEBA）等苯并吖啶酮类衍生试剂的设计合成和表征，荧光衍生试剂苯并香豆素—3—羧酸的设计合成。 第三章：荧光衍生试剂EASC用于雌激素的高效液相色谱—质谱分析。通过对衍生化条件、色谱分离条件、质谱检测条件的优化，分别建立了柱前衍生高效液相色谱质谱检测的方法和柱前衍生高效液相色谱荧光检测方法，并将两种方法应用于血浆、尿样、藏羚羊粪便等实际样品的测定，实现了这些样品中激素雌二醇和雌三醇的高灵敏质谱检测和荧光检测。该试剂的衍生产物物在紫外、荧光和质谱的检测灵敏度高于常用的试剂丹磺酰氯衍生产物的检测灵敏度。 第四章：荧光衍生试剂EASC用于胺类化合物的高效液相色谱—质谱分析。通过对衍生化条件和色谱分离条件的优化，建立了多种脂肪胺的柱前衍生反相高效液相色谱荧光检测方法，并将该方法应用于环境水样中脂肪胺的测定，实现了环境样品中脂肪胺的高灵敏检测。探讨了该试剂衍生物的质谱增敏机理，并通过软件计算对其质谱增敏程度进行了预测估计。 第五章：荧光衍生试剂10—乙基吖啶酮—3—磺酰肼，通过对衍生反应、色谱条件的优化，建立了多种脂肪醛类化合物同时测定的柱前衍生高效液相色谱分离荧光检测分析方法，并同时进行了柱后质谱检测分析，并将此方法成功应用于饮料酒中脂肪醛的检测中。 第六章：设计开发了一种醛类化合物测定的新型衍生化反应，通过对衍生反应、色谱分离条件的优化，建立了多种脂肪醛类化合物同时测定的柱前衍生高效液相色谱分离荧光检测分析方法。 第七章：荧光衍生试剂5—（2—羟乙基）苯并[b]吖啶酮（HEBA），通过对衍生化条件和色谱分离条件的优化，建立了20种脂肪酸的柱前衍生化高效液相色谱荧光检测法，并将方法应用于食品木耳中脂肪酸的测定，实现了木耳样品中20种脂肪酸的色谱分离和高灵敏检测。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章高效液相色谱及柱前化学衍生化的应用进展

1高效液相色谱及高效液相色谱-质谱研究进展

1.1高效液相色谱法的发展

1.2高效液相色谱的分类及应用

1.3高效液相色谱的特点

1.4高效液相色谱-质谱联用技术的研究进展

2化学衍生化(标记)研究进展

2.1衍生化及其分类

2.2常用衍生化反应简介

3荧光衍生化(荧光标记)

3.1荧光检测的特点

3.2影响荧光强度的因素

3.3荧光衍生物荧光量子效率

3.4荧光标记

4近年来开发的荧光衍生化试剂

5柱前衍生高效液相色谱分析的应用进展

5.1生命科学领域中的应用

5.2在药物分析研究中的应用

5.3在食品分析中的应用

5.4在环境污染分析中的应用

6计算机辅助方法建立在柱前衍生高效液相色谱方法建立中的意义和研究进展

7选题思想和主要研究内容

第二章荧光标记试剂的设计与合成表征

1吖啶酮磺酰氯类荧光标记试剂的设计合成及表征

1.1合成反应概况图

1.2试剂

1.3仪器

1.4 10-乙基吖啶酮-2-磺酰氯(EASC)的合成

1.5吖啶酮磺酰氯类其他标记试剂的设计合成

2苯并吖啶酮类荧光标记试剂的设计合成及表征

2.1苯并吖啶酮类试剂的设计合成反应概况图

2.2试剂

2.3仪器

2.4 苯并[c]吖啶酮的合成

2.5 9-羟乙基苯并[b]吖啶酮的合成

3苯并香豆素-3-羧酸荧光标记试剂的设计合成及表征

第三章衍生试剂10-乙基吖啶酮-2-磺酰氯用于雌激素的高效液相色谱质谱和荧光定量分析

第一节10-乙基吖啶酮-2-磺酰氯雌激素衍生物的紫外荧光和质谱性质

1紫外光谱

2荧光光谱

3质谱

4质谱增敏机理

第二节10-乙基吖啶酮-2-磺酰氯用于痕量游离雌激素的高效液相色谱质谱定量分析

1实验部分

2结果与讨论

3实际样品分析

4小结

第三节衍生试剂10-乙基吖啶酮-2-磺酰氯用于痕量雌激素的高效液相色谱荧光定量分析

1实验部分

2结果与讨论

3结论

第四章衍生试剂10-乙基吖啶酮-2-磺酰氯用于痕量胺类化合物的高效液相色谱质谱分析

1实验部分

1.1试剂与仪器

1.2 实验过程

1.3色谱及质谱条件

2结果与讨论

2.1 质谱性质

2.2质谱增敏机理

2.3衍生条件的优化

2.4色谱分离及质谱鉴定

2.5线性回归方程、检测限和重现性实验

2.6环境水样富集测定

第五章衍生试剂10-乙基吖啶酮-2-磺酰肼用于醛类化合物的高效液相色谱质谱分析

1试验部分

1.1仪器与试剂

1.2标准溶液的配制

1.3标准品的衍生过程

1.4色谱条件

1.5质谱条件

2结果与讨论

2.1衍生条件的优化

2.2光谱性质

2.3色谱分离及质谱检测

2.4线性回归方程及检出限

2.5重现性

2.6样品分析

3 结论

第六章新型衍生反应用于醛类化合物的高效液相色谱质谱分析

1实验部分

1.1试剂与仪器

1.2实验过程

1.3色谱及质谱条件

2结果与讨论

2.1衍生反应的设计及机理

2.2衍生条件的优化

2.3菲醌衍生产物光谱性质

2.4色谱分离及质谱鉴定

2.5线性回归方程、检测限和重现性实验

第七章5-(2-羟乙基)苯并[b]吖啶酮衍生物用于脂肪酸标记及质谱鉴定

1实验部分

1.1仪器与试剂

1.2标准溶液配制

1.3标准品衍生化

1.4色谱与质谱条件

1.5木耳中游离脂肪酸的提取

2结果与讨论

2.1.HEBA光谱性质

2.2衍生条件的优化

2.3标准品的色谱分离及质谱鉴定

2.4线性回归方程、检出限及重现性

2.5实际样品测定

3结论

参考文献

在校期间的研究成果及发表的学术论文

致谢