南四湖环棱螺的形态分类及分子系统发育研究

摘要

环棱螺属Bellamya隶属于软体动物门Mollusca、腹足纲Gastropoda、前鳃亚纲Prosobranchia、原始纽舌目Mesogastropoda田螺科Viviparidae。环棱螺属除南美以外,广泛分布于世界各地的淡水水域中,如亚洲、非洲、北美,现已发现150种,31属被鉴定。环棱螺属的一些物种是众多寄生虫(如吸虫类)的中间宿主,因而对于医学和兽医学研究具有十分重要的价值。
　　本文以2011年采集于南四湖湿地的环棱螺类为供试材料,首先以传统的形态学分类法对样本进行初步鉴定与分类,然后以18S rDNA、28S rDNA、ITS的部分序列为分子标记,进行遗传距离分析、系统进化分析、同源性分析,探讨环棱螺类的分类地位以及与其它地区不同种类环棱螺的亲缘关系,以期为南四湖环棱螺遗传资源的保护与利用提供相关的理论依据。主要研究内容如下:
　　1.对南四湖环棱螺类的形态观察发现,仅通过外形的描述很难明确的区分出环棱螺的种类,分类特征不十分明显;而相关形态参数的聚类分析将南四湖环棱螺类聚为三支;据此,可将南四湖采集的环棱螺类分为三类,即铜锈环棱螺、方形环棱螺与梨形环棱螺。
　　2.以南四湖环棱螺类的基因组DNA为模板,根据腹足纲通用引物,PCR扩增出9条目的片段,经目的片段的回收、克隆、测序,并进行遗传距离与标准差的分析,结果显示,铜锈环棱螺与方形、梨形环棱螺为不同的种类,方形环棱螺与梨形环棱螺的遗传距离与标准差为0.000,二者亲缘关系极其相近,初步推断二者为同一物种。
　　3.以18S rDNA、28S rDNA、ITS的部分序列为分子标记,分别进行同源性分析,结果表明方形环棱螺与梨形环棱螺的相似性在99％以上,可见二者的亲缘关系十分接近;系统进化分析结果也显示,无论属间的还是科间的聚类分析,这两种螺类始终聚在一支上,进一步提示二者在分类地位上的一致性,应为同物异名。

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第一章 文献综述

1.1 环棱螺的生物学特征

1.2 环棱螺的多样性与地理分布

1.3 田螺分类研究现状

1.4 分子系统学及其应用

1.5 南四湖的自然概况

1.6 本研究的目的与意义

第二章 材料与方法

2.1 标本采集

2.2 环棱螺形态分析

2.3 分子生物学研究方法

第三章 结果与分析

3.1 环棱螺的形态特征分析

3.2 环棱螺基因组DNA的质量及纯度检测

3.3 目的片段的扩增及菌体PCR检测

3.4 测序结果分析

3.5 碱基组成分析

3.6 遗传距离分析

3.7 邻接法（NJ）聚类分析

3.8 最大简约法（MP）分析

3.9 最大似然法(ML)分析

3.10 同源性分析

3.11 小结

第四章 讨论

4.1 方形环棱螺与梨形环棱螺为同名异物

4.2 铜锈环棱螺与方形环棱螺的地位

4.3 基因组DNA提取效果分析

4.4 PCR效果分析

参考文献

致谢