拮抗冬枣黑斑病链霉菌K14固态发酵和菌剂的初步研究

摘要

冬枣黑斑病是一种真菌性病害，严重影响着枣果的生产。在病害防治上，传统化学防治不利于生态可持续发展，农业栽培防治易受环境限制，这就促使人们不断探寻生物防治，例如从链霉菌菌体内分离纯化抗生素或利用菌体制备生防菌剂等，但对冬枣果实病害的生物防控还处于初级研究性阶段。拮抗冬枣链霉菌K14是本实验室从沾化县冬枣栽培区的根际土壤中筛选得到的一株白黄链霉菌，在实验室环境下与冬枣黑斑病菌平板对峙实验效果较好。本文旨在为链霉菌K14的冬枣黑斑病生防制剂提供参考。研究结果如下：
　　1.为了制作孢子粉状制剂，进行拮抗冬枣黑斑病链霉菌K14的固态产孢优化实验。利用糙米、玉米粉、黄豆粉、碎麦秆、麸皮农副产品通过优化发酵得到最佳产孢组合为A1B3C3D3，即糙米与无机盐液的比例为1:1.3，糙米与黄豆粉百分比为15％，糙米与玉米粉百分比为30％，糙米与麸皮百分比为15％，在30℃、初始pH为7.4、接种量为6％、装载量为100g条件下获得最大产孢量为37×108cfu/g。
　　2.对菌剂进行初探，选择价廉并且易得的菌剂载体，即高岭土和过期面粉，发现二者均不抑制菌体生长，选择果形一致、无病虫害、无机械损伤的冬枣，将菌剂作用到采后冬枣上，发病率从90％降低到31.7％。
　　3.以拮抗链霉菌K14作为出发菌株，对其进行物理微波辐射诱变和化学氯化锂诱变，在0-90s内随着微波辐射时间的延长，菌株的致死率大幅度上升；随着氯化锂质量浓度的增加，菌体死亡率也逐步上升。诱变后以冬枣黑斑病菌为指示菌利用琼脂块法进行平板初筛，之后再利用杯碟法进行摇瓶复筛。并将筛选得到的拮抗冬枣黑斑病能力高于原始菌株的突变菌株进行保藏。
　　4.以果形一致、无病虫害、无机械损伤的采后枣果为原料，接入拮抗链霉菌K14的孢子悬浮液、培养原液、无菌过滤液、菌体破碎液和灭菌液，发现五种发酵处理液均可降低冬枣黑斑病的发病率，为采后冬枣贮藏提供思路。