拮抗冬枣黑斑病菌链霉菌的获得及其产物活性研究

摘要

冬枣黑斑病是由细极链格孢(Alternaria tenuissima)引起的一种真菌性病害,严重制约着冬枣的产业发展。本文以沾化县冬枣栽培区的根际土壤作为菌种的获得来源,采用琼脂块法筛选出一株对冬枣黑斑病病原有着很好的抑菌效果的放线菌,并进行了放线菌分类鉴定,旨在为冬枣黑斑病生防药物的开发提供新的菌种。研究结果如下:
　　1、对山东沾化县冬枣栽培区不同质地、不同种植年限土壤微生物数量和养分状况进行研究发现,沾化县冬枣栽培区根际土壤微生物总数明显高于根外(非根际),呈现出明显的根际效应。并且随着冬枣枣树种植年限增加,微生物总数呈现增加趋势。土壤中细菌数量最多,其次为放线菌和真菌,并且链霉菌种类繁多。该地区砂质土壤中微生物数量高于粘质土壤,因为砂质土壤通风性较好,有利于微生物生长。
　　2、本实验共分离到520株放线菌。用琼脂块法进行初步筛选,得到8株具有很好的广谱抑菌性的放线菌,通过对发酵液进行抑菌活性测定,获得了一株既具有广谱抑菌性并且对沾化冬枣黑斑病病原有显著地抑菌性的放线菌,命名为K14,琼脂块法测得的对冬枣黑斑病致病菌的平均抑菌圈直径达到30 mm。
　　3、采用多相分类技术对拮抗放线菌K14进行了分类鉴定。将 K14初步鉴定为白黄链霉菌(Streptomyces alboflavus)。
　　4、采用单因素和正交试验相结合,对放线菌K14的发酵培养基和发酵工艺条件进行了优化。得出K14菌株的发酵最适培养基为:葡萄糖为3％磷酸氢二钠为0.05％,氯化钠为0.05％,硫酸镁为0.1％,玉米粉为2％,蛋白胨为0.1％,黄豆粉为4％,。最佳发酵工艺条件为:摇瓶装液量为100mL,发酵培养基初始pH7.5,培养温度28℃,摇床转速180r/min,发酵时间为144h。
　　5、对放线菌K14发酵液中的抑菌活性物质的稳定性进行研究。试验表明,菌株具有良好的遗传稳定性,传代多次后仍然具有很高的抑菌活性。其活性产物具有较好的耐热性和耐碱性,但是在酸性条件和紫外光照的环境下抑菌活性显著降低。
　　6、对发酵液的理化性质进行研究发现,该活性物质极性较强,是一种酯溶—水溶性的抗生素,并且具有典型的碱性抗生素所具有的特征。由发酵萃取液的紫外全波段扫描和薄层层析试验可知发酵液中抑菌活性物质可能为单一组分。

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文献综述

第一部分 沾化县冬枣栽培区土壤微生物区系的研究

1.1 材料

1.2 方法

1.3 结果与讨论

第二部分 拮抗放线菌的筛选

2.1 材料

2.2 方法

2.3 结果与讨论

2.4 小结

第三部分 优势拮抗放线菌K14的分类与鉴定

3.1 材料

3.2 方法

3.3 结果与讨论

3.4 小结

第四部分 放线菌K14发酵条件的优化

4.1 材料

4.2 方法

4.3 结果与讨论

4.4 小结

第五部分 放线菌K14所产抑菌活性物质的稳定性及理化性质的研究

5.1 材料

5.2 方法

5.3 结果与讨论

5.4 小结

全文总结和展望

参考文献

致谢