毛细管电泳检测多种靶DNA及小分子化合物

摘要

本工作将毛细管电泳—电化学检测技术引入靶DNA分析中，将辣根过氧化物酶(HRP)催化过氧化氢(H2O2)氧化邻氨基酚的酶促反应与其氧化产物的电极还原相偶合，利用毛细管电泳电化学检测技术间接检测邻氨基酚—H2O2-辣根过氧化物酶(HRP)体系中的HRP含量。在此基础上引入生物素．亲合素系统，通过毛细管电泳安培法进行分离检测21个、39个、80个碱基的靶DNA。 第一章为绪论，介绍了毛细管电泳技术的发展和研究现状以及本课题的意义；第二章介绍了毛细管电泳电化学间接检测HRP的情况；第三章用毛细管电泳电化学检测21个、39个、80个碱基的靶DNA；第四章用毛细管电泳电化学检测小分子化合物腺苷；第五章用毛细管电泳电化学发光检测腺苷。 在最佳反应条件下，测定游离HRP检测限为1.09×10-12mol·L-1(S/N=3)，线性范围为2-3×10-12～3.5×10-10mol·L-1。 利用此方法成功应用于检测21个碱基的靶DNA，测定线性范围为4.0×10-11-2.0×10-9mol·L-1，检测限为1.2×10-11mol·L-1(S/N=3)。对1.0×10-10mol·L-1的21个碱基ssDNA进行7次平行测定，相对偏差为7.2％。在实验条件最优化的情况下，可以达到通过毛细管电泳安培法对21个碱基的单链DNA进行分离检测。 利用此方法成功应用于检测39个碱基的靶DNA，测定线性范围为5.0×10-11-1.2×10-9mol·L-1，检测限为2.4×10-11mol·L-1(S/N=3)。对1.0×10-10mol·L-1的39个碱基ssDNA进行7次平行测定，相对偏差为6.4％。在实验条件最优化的情况下，可以达到通过毛细管电泳安培法对39个碱基的单链DNA进行分离检测。 利用此方法成功应用于榆测80个碱基的靶DNA，测定线性范围为5.0×10-11-1.0×10-9mol·L-1，检测限为3.0×10-11mol·L-1(S/N=3)。对1.0×10-10mol·L-1的80个碱基ssDNA进行7次平行测定，相对偏差为6.9％。在实验条件最优化的情况下，可以达到通过毛细管电泳安培法对80个碱基的单链DNA进行分离检测。 利用此方法应用于同时检测21个、39个、80个碱基的单链DNA，成功实现了同时进行多个单链DNA的分离检测。 利用毛细管电泳电化学方法成功应用于检测小分子化合物腺苷，通过实验，本文得出运用2.5×10-2mol·L-1 pH8.6的Tris缓冲液，10kV作为分离电压，12kV和5s作为进样电压和进样时间可以对腺苷进行分离。 利用毛细管电泳电化学发光法成功应用于检测腺苷，通过实验，本文得出运用0.04mol·L-1 pH7.40的PBS缓冲液，12kV作为分离电压，15kV和5s作为进样电压和进样时间，1.2V作为检测电势可以对腺苷进行分离，灵敏度达到1×10-8mol·L-1。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章 前言

1.毛细管电泳技术简介

1.1毛细管电泳的历史发展过程

1.2毛细管电泳的分离模式

1.3毛细管电泳进样技术

1.4毛细管电泳技术的特点

1.5毛细管电泳检测技术的发展

2.毛细管电泳分析DNA、蛋白质或小分子化合物

2.1 DNA及碎片分析

2.2蛋白质分析

2.3小离子与细胞分析

2.4毛细管电泳技术的前景展望

3.毛细管电泳电化学酶催化分析

3.1电化学酶催化分析标记物

3.2毛细管电泳酶催化分析

3.3毛细管电泳酶催化分析的综合应用展望

4.毛细管电泳电化学发光在分析科学中应用

4.1毛细管电泳电化学发光技术简介

4.2 Ru(bpy)3 2+电化学发光机理及特点

4.3电化学发光在分析科学中的发展

4.4毛细管电泳电化学发光技术的研究与应用

4.5毛细管电泳电化学发光技术展望

5.课题意义及主要内容

第二章 毛细管电泳间接检测OAP-H2O2-HRP体系中的HRP

1.引言

2.实验部分

2.1仪器与试剂

2.2实验方法

3.结果与讨论

3.1 AP的电化学行为

3.2运行缓冲溶液浓度和pH值的影响

3.3分离电压的影响

3.4检测电势的影响

3.5进样时间和电压

3.6检测AP的重现性、检测限和线性范围

3.7 HRP的检测

4.小结

第三章 OAP-H2O2-HRP体系中毛细管电泳电化学检测21、39、80个碱基序列的靶DNA

1.引言

2.实验部分

2.1仪器与试剂

2.2实验方法

3.结果与讨论

3.1 AP的电化学行为

3.2运行缓冲溶液浓度和pH值的影响

3.3分离电压的影响

3.4检测电势的影响

3.5进样时间和进样高度

3.6亲合素标记的HRP对实验结果的影响

3.7靶DNA的检测

3.8线性范围、精密度及检测限

4.小结

第四章 基于DNA适体的毛细管电泳电化学检测腺苷的研究

1.引言

2.实验部分

2.1仪器与试剂

2.2实验方法

3.结果与讨论

3.1运行缓冲溶液浓度影响

3.2分离电压的影响

3.2检测电势的影响

3.4进样时间和进样高度

3.5亲合素标记的HRP对实验结果的影响

3.6腺苷的检测

3.7线性范围、精密度及检测限

4.小结

第五章 基于核酸适体的毛细管电泳-电致发光检测腺苷

1.引言

2.实验部分

2.1仪器与试剂

3.结果与讨论

3.1缓冲液pH值和浓度的影响

3.2分离电压的影响

3.3检测电势的影响

3.4腺苷的电泳图

3.5线性范围、精密度及检测限

3.6对照实验

4.小结

第六章 结论

参考文献

致谢

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