不同浓度富血小板血浆应用于骨组织工程的研究

摘要

目的：体外观察不同浓度犬富血小板血浆(PRP)对自体骨髓间充质细胞(MSCs)增殖、分化和mRNA表达的影响，初步评估PRP对MSCs的骨诱导作用，并得到最佳使用浓度，探讨组织工程学方法用于骨组织再生的可行性。 方法：利用二次离心法提取狗静脉血中的PRP，行血小板计数，激活制备富生长因子血清(serumrichingrowthfactors，SRGF)，并与无血清D-MEM/F-12液配制得到1％、5％、10％、20％、30％共5个浓度的SRGF；利用密度梯度离心法提取培养狗MSCs并进行传代，每日观察并照相；利用四唑盐比色法(MTT法)观察不同浓度PRP(1％、5％、10％、20％、30％)于第1、3、5、7、9天共5个时间点对MSCs增殖的影响；用酶动力学法测定不同浓度PRP及rhBMP于第3、6、9、12天碱性磷酸酶(ALP)活性影响；对经PRP诱导后的MSCs用改良钙钴法行ALP染色，茜素红法行矿化结节染色，分7、14、21、28d4个时间点测量骨钙素(OCN)的含量；半定量RT-PCR法测定不同浓度PRP及rhBMP诱导后的MSCs中ALPmRNA及OCNmRNA水平。 结果：原代培养的骨髓间充质细胞24-48h开始贴壁，12d后细胞融汇成单层，细胞多呈成纤维梭形细胞形态，经PRP诱导后，细胞数目明显增多，形态渐变为方形、多角形，4-5天融成单层，8-10天形成多层细胞层；血小板记数显示PRP中血小板浓度为全血的5.38倍，含量达到要求；MTT法检测见各浓度PRP组均出现不同程度增殖，10％PRP组尤为显著；酶动力学法测定示各浓度PRP组ALP活性均较对照组增高，10％PRP组和rhBMP更为显著；MSCs经PRP诱导后，ALP染色强阳性；钙化结节增多；骨钙素表达量增高，有显著差异；经不同浓度PRP诱导后的MSCs经半定量RT-PCR分析见ALPmRNA及OCNmRNA水平均增高，其中以10％PRP组和rhBMP为显著。 结论：本实验中各浓度(1％、5％、10％、20％、30％)PRP均能有效的促使MSCs向成骨细胞分化，促进骨再生。其中以10％PRP为最佳浓度，可用来修复骨缺损，是组织工程骨研究的一个突破。

目录

文摘

英文文摘

前言

1材料与方法

2.结果

3讨论

小结

参考文献

致谢

PRP在口腔医学领域的应用

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