siRNA对宫颈癌Hela细胞HPV18型E6、E7基因干扰作用的研究

摘要

目的:探讨siRNA(short interfering RNAs)对宫颈癌细胞人乳头状瘤病毒(HPV)18型E6、E7 mRNA表达的干扰作用。 方法:(1)采用体外转录方法合成HPV18E6、E7 siRNA(2)用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞活性[以(A)值表示]，筛选出最合适转染浓度：通过阳离子脂质体将E6、E7 siRNA转染入靶细胞宫颈癌细胞系Hela细胞中，实验分为3组，转染E6siRNA组(转染E6 siRNA)，转染E7siRNA组(转染E7 siRNA)，设未转染细胞为对照组。采用RT-PCR技术分别检测转染后24、48、72 h HeLa细胞中HPV18E6、E7 mRNA的表达。流式细胞仪检测细胞周期。 结果:(1)转染E6siRNA组细胞A值为0.57±0.05，转染E7siRNA组细胞A值为0.62±0.04，对照组为0.87±0.05，转染组与对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。转染E6siRNA组转染前E6 mRNA表达水平为0.63±O.04，转染后24、48、72 h，其表达水平分别为0.53±0.04、0.46±0.02、0.56±0.03： (2)转染E7siRNA组转染前E7mRNA的表达水平为0.66±0.03，转染后分别为0.60±0.05、0.52±0.04、0.59±0.02，转染E6、E7siRNA组各转染时间点分别与其转染前比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)。(3)转染E6siRNA组S期细胞平均DNA含量为(0±5.5)％，G2期细胞为(66.9±3.5)％；E7转染组S期细胞平均DNA含量为(5.6±4.2)％，G2期细胞为(47.2±0.5)％，E6、E7转染组各细胞周期分别与对照组[S期细胞为(39.4±0.4)％，G2期细胞为(1.4±1.2)％]比较，差异均有统计学意义(P＜O.05)。 结论:宫颈癌Hela细胞中确实存在RNA干扰现象，HPV对外源性E6、E7 siRNA的干扰具有特异性。

目录

文摘

英文文摘

引言

第一章HPVE6、E7siRNA的体外转录合成

第二章HPVE6、E7 siRNA对宫颈癌细胞系Hela细胞的干扰研究

结论

参考文献

文献综述 宫颈癌和RNA干扰

攻读学位期间的研究成果

附录 缩略词表

致谢

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