活血化瘀汤对大鼠急性高眼压模型视网膜谷氨酸转运体GLAST表达的影响

摘要

目的：探讨中药活血化瘀汤方剂对大鼠急性高眼压模型视网膜谷氨酸转运体GLAST表达的影响 方法：健康Wistar大鼠45只，随机分为A、B、C三组，其中A组5只为正常对照组，B、C两组每组各20只，随机取其一眼制作急性高眼压模型，B组为单纯加压组。C组于造模后灌胃给予活血化瘀汤，4ml/d，分别于给药后1、3、7、14d每个时间点随机取5只处死。B组在与C组相同的时间点每个时间点随机取5只处死。用荧光免疫组化及实时定量聚合酶链反应方法检测大鼠急性高眼压模型和正常大鼠视网膜中谷氨酸转运体GLAST的表达变化，并对不同时间点视网膜组织行透射电镜及光学显微镜观察。 结果：1、光学显微镜：模型制作后第3天，视网膜变薄，视网膜神经节细胞数量有所减少；模型制作后第7天，视网膜进一步变薄，特别是内丛状层，视网膜神经节细胞数量明显减少；模型制作后第14天，视网膜厚度变的更薄，以内层为甚，视网膜内、外核层细胞排列稀疏，数量减少。各时间点活血化瘀汤治疗组与单纯加压组相比，视网膜的厚度较厚，存活的视网膜神经节细胞的数量较多，损伤均轻于单纯加压组。 2、透射电子显微镜：模型制作后第1天见视网膜神经节细胞核染色质凝集，细胞器退变，线粒体空泡变性，残存线粒体嵴，内质网轻度肿胀，核周隙略有增宽，溶酶体肿大。模型制作后第14天见神经节细胞数目明显减少，细胞器严重变性，核溶解，未见核膜和核仁，部分滑面内质网崩解，粗面内质网脱颗粒，极度扩张，线粒体高度膨胀，破裂，内腔有大量絮状致密物，嵴消失，空泡变性。各时间点活血化瘀汤治疗组与单纯加压组相比，视网膜神经节细胞的细胞器变性程度较轻，细胞凋亡的数量较少，损伤均轻于单纯加压组。 3、荧光免疫组织化学：(1)单纯加压组：GLAST的表达量在模型制作后1d快速上调，与正常对照组比较差异有高度统计学意义(P<0.01)，3d时表达量下降(P<0.05)，7d时恢复至正常水平（P>0.05），14d时与正常对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)；(2)活血化瘀汤治疗组：GLAST的表达量在模型制作后1d快速上调，与正常对照组比较差异有高度统计学意义（P<0.01），与同时间点的单纯加压组比较差异有统计学意义(P<0.05)；3d时表达量下降（P<0.01），与同时间点的单纯加压组比较差异有统计学意义（P<0.05），与正常对照组比较差异有高度统计学意义(P<0.01)；7d，14d时与单纯加压组及正常对照组比较均无统计学意义（P>05）。 4、实时定量聚合酶链反应：(1)单纯加压组：GLASTmRNA的表达量在模型制作后1d快速上调，与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)，3d时表达量下降（P<0.01），7d时恢复正常水平(P>0.05)，14d时与正常对照组相比差异无统计学意义(P>0.05）；(2)活血化瘀汤治疗组：GLASTmRNA的表达量在模型制作后1d快速上调，与正常对照组比较差异有高度统计学意义（P<0.01），与同时间点的单纯加压组比较差异有统计学意义(P<0.05);3d时表达量恢复至正常水平(P>0.05），与同时间点的单纯加压组比较差异有统计学意义(P<0.05)；7d，14d时与单纯加压组及正常对照组比较均无统计学意义(P>0.05)。 结论： 1、大鼠视网膜急性高眼压损伤后，视网膜厚度变薄，以内层为甚，视网膜神经节细胞数量减少，部分细胞凋亡。 2、在急性高眼压损伤后各组GLAST的表达趋势均呈现先快速上调、后渐下降、最终趋于正常水平的过程。活血化瘀汤治疗组较单纯加压组上调幅度高、降幅小、达到正常表达水平所需的时间短。 3、活血化瘀汤中药方剂有可能通过增强谷氨酸转运体GLAST的表达，减轻急性高眼压对大鼠视网膜的损伤。

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结论

参考文献

附图

视网膜中的谷氨酸转运体

攻读学位期间的研究成果

致谢