预防性应用克罗卡林对脑缺血再灌注大鼠谷氨酸受体1a和谷氨酸转运体1的影响

摘要

目的：观察ATP敏感性钾通道（KATP）开放剂克罗卡林对大鼠脑缺血再灌注后脑梗死体积、谷氨酸受体1α(mGluRlα)、谷氨酸转运体1（GLT-1或者EAAT-2）的影响，探讨其减轻谷氨酸兴奋毒性、保护神经元的作用机制。
　　 方法：将54只3～4月龄雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、克罗卡林组，每组18只。模型组和克罗卡林组应用ZeaLonga线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)的脑缺血再灌注模型，克罗卡林组克罗卡林10mg/kg于栓塞大脑中动脉前30分钟腹腔注射，模型组制作脑缺血再灌注模型，假手术组仅手术暴露颈总、颈外和颈内动脉，不予阻塞。脑缺血再灌注24h，Bederson法评估大鼠的神经行为学功能，氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察脑梗死体积，免疫组化染色检测脑组织谷氨酸受体1α(mGluRlα)和谷氨酸转运体1(GLT-1、EAAT-2)的表达，测定脑组织神经细胞内游离钙离子含量。初步探讨预防性应用克罗卡林减轻脑缺血再灌注大鼠谷氨酸兴奋毒性的作用机制。所有实验数据以均值±标准差[(X)±S)表示。所得数据用SPSS13.0软件进行分析，组间比较采用单因素方差分析。
　　 结果：
　　 1、神经行为功能评分模型组和克罗卡林组与假手术组神经行为功能评分显著差异性(P＜0.01);克罗卡林组与模型组与相比，神经行为功能评分显著改善，(P<0.05)2、脑梗死体积假手术组脑组织TTC染色后，两侧皮层呈均匀的橘红色，未见梗死灶。模型组和克罗卡林组脑切片上可见较大的苍白色梗死区。克罗卡林组梗死体积显著小于模型组(p<0.05)。
　　 3、缺血侧皮质区mGluRlα的表达假手术组缺血侧皮质区mGluRlα表达较少，模型组可见大量mGluRlα表达，与假手术组组比较差异有显著性意义(P<0.05)，主要分布于缺血侧皮质及海马神经元:克罗卡林组与模型组比较，mGluRlα的表达明显减少，差异有显著性意义(P<0.05)。
　　 4、缺血侧皮质区EAAT-2的表达假手术组缺血侧皮质区EAAT-2表达较多，模型组的EAAT-2表达与假手术组相比明显减少，其差异有显著性意义(P＜0.05);克罗卡林组的EAAT-2表达与假手术组相比明显增多，其差异有显著性意义(P<0.05)5、脑组织神经细胞内Ca2+含量模型组脑组织细胞内Ca2+较假手术组明显增加，其差异有显著性意义(P<0.01);克罗卡林组脑组织神经细胞内Ca2+较模型组明显减少，其差异有显著性意义P<0.01）。
　　 结论：
　　 1、预防性应用克罗卡林能显著改善脑缺血再灌注大鼠神经行为功能评分，减小脑梗死体积，减轻脑缺血再灌注损伤。
　　 2、预防性应用克罗卡林能够降低脑缺血再灌注大鼠mGluRlα表达，上调EAAT-2的表达，减轻谷氨酸兴奋毒性，保护神经元。
　　 3、预防性应用克罗卡林能够降低脑缺血再灌注大鼠神经细胞内Ca2+含量，减轻细胞内钙超载，减轻脑缺血再灌注损伤。