海洋来源产酶微生物的筛选、鉴定及其外泌产物的生物学作用探索

摘要

目的:筛选海洋来源高产酶的细菌、放线菌，对其进行形态学、生理生化性质、分子生物学鉴定初步确定种属，并研究其生长特性及外泌产物的生物学作用。
　　 方法:对从青岛黄海海域的鱼类、贝类、海水、海泥等样品中分离的产酶细菌、放线菌，分别用蛋白酶、淀粉酶、胶原酶酶活力测定方法进行高产株的筛选；常规微生物学方法鉴定其形态及生理生化特性，分子生物学鉴定方法初步确定种属；检测高产株的最适生长温度、pH值、NaCl浓度以及在不同温度、生长时间、pH值条件下的产酶能力，优化产酶条件；以发酵液上清为样品，经SDS-PAGE初步确定分泌物的分子量，研究其酶的最适作用温度、最适作用pH值等；从酶活性、抗肿瘤活性、免疫活性等方面初步探索代谢物的生物学作用。
　　 结果:从鲳鱼消化道中筛选出高产蛋白酶菌株XF-1，16S rRNA基因测序和系统发育树分析证实该菌为Aranicola proteolyticus；该菌为革兰染色阴性杆菌，好氧，无芽孢，无荚膜，有鞭毛。在奶粉平板上的菌落：直径1-2mm，圆形乳白色、光滑、边缘整齐、半透明。其生长温度范围为15-37℃，最适生长温度为25℃。生长pH范围：5.5-9.0，最适生长pH为7.5。生长NaCl浓度为0-6％，最适浓度为1％；所产蛋白酶活力约145 U/mL，最佳产酶条件为pH7.5、25℃振荡培养28h；经SDS-PAGE初步确定蛋白酶的分子量约为43-55KD，最适酶活温度为40℃，最适pH为7.5；XF-1可以分泌多种物质，对酪蛋白具有分解作用，对奶粉具有凝集作用，具有一定的抗肿瘤和免疫增强的生物学作用。
　　 结论:成功筛选出蛋白酶高产菌株XF-1，其产生的代谢物具有较好的生物学作用，有望成为一种新型的海洋微生物蛋白酶资源。