Dectin-1介导的人角膜上皮细胞对烟曲霉菌的固有免疫反应

摘要

目的:研究Dectin-1在烟曲霉菌孢子抗原刺激人角膜上皮细胞形成的真菌性角膜炎模型中的固有免疫反应中的作用。
　　 方法:用自制的烟曲霉菌孢子抗原刺激培养的人角膜上皮细胞株，以RT-PCR检测各组细胞中Dectin-1 mRNA的表达；用免疫细胞化学方法及酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测细胞中Dectin-1蛋白的表达；以ELISA法检测细胞培养上清中NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-10和CXCL1的浓度。统计学处理采用SPSS17.0软件进行单因素方差分析。
　　 结果:在正常和烟曲霉菌抗原刺激后的人角膜上皮细胞中用RT-PCR均能检测到Dectin-1 mRNA的表达，Dectin-1 mRNA表达随刺激时间增长而逐渐增多，且在2h时达高峰，刺激后各组同空白组相比差距有统计学意义(P=0.000)；用免疫细胞化学方法检测各组细胞中dectin-1蛋白均有表达；ELISA测得HCECs总蛋白中Dectin-1正常组有表达，刺激后0.5h蛋白含量下降，1h起升高，2h含量达高峰，随后下降，刺激后各组同空白组相比差距有统计学意义(P=0.000)；ELISA法检测各组细胞培养上清中NF-κ B刺激后含量增高，2h含量达高峰，刺激后各组同空白组相比差距有统计学意义(P=0.000)；TNF-α，CXCL1和IL-1β刺激后含量增高，分别在刺激2h、4h、1h后达高峰，IL-10刺激后含量增高缓慢，6h增高达高峰，这四个指标刺激后各组同空白组相比差距均有统计学意义(P=0.000)。
　　 结论:
　　 1、正常的人角膜上皮细胞中存在Dectin-1基因和蛋白水平的表达。
　　 2、用自制的烟曲霉菌孢子抗原刺激正常的人角膜上皮细胞可引起Dectin-1合成量的变化，提示Dectin-1在该真菌性角膜炎模型中可被激活。
　　 3、NF-KB在该真菌性角膜炎模型中表达增加，同时相关炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-10和CXCL1的含量变化提示他们也参与了该真菌性角膜炎模型中的免疫反应。