尿酸下调人骨髓间充质干细胞体外诱导为成骨细胞过程中11β-HSD1的表达

摘要

目的:探讨在体外诱导人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)向成骨细胞分化过程中，尿酸对hBMSCs的成骨能力以及尿酸对11β-羟化类固醇脱氢酶1(11β-HSD1)表达及其功能的影响。方法:全骨髓体外分离培养健康成年人骨髓间充质干细胞，利用细胞形态学及细胞表面标志物对其进行鉴定，培养hBMSCs至第三代后分别以完全培养基（含体积分数10％的FBS、1％的双抗、89％的低糖DMEM）为空白对照组、以成骨培养基（含10-8mol/L地塞米松、50mg/L维生素C、10-2mol/Lβ-甘油磷酸钠的完全培养基），和尿酸干预成骨培养基（分别含0.2、0.4、0.8 mmol/L尿酸的成骨培养基）为条件对照组对细胞进行培养和诱导。培养诱导14天后，倒置显微镜观察细胞形态，碱性磷酸酶染色和茜素红染色进行成骨细胞鉴定，11β-HSD1免疫细胞化学染色、RT-PCR技术检测各组中11β-HSD1 mRNA表达。结果:(1)分离培养的细胞表面标志物CD44表达阳性，CD34表达阴性，实验获得了高纯度hBMSCs。(2)成骨培养基和各尿酸干预成骨培养基诱导的细胞其碱性磷酸酶染色和茜素红染色均为阳性且随着尿酸浓度增高钙结节数量逐渐增多(P＜0.05)(3)免疫细胞化学染色技术:各组细胞的细胞浆里都有棕黄色阳性染色颗粒，病理图象分析软件测定11β-HSD1含量（以光密度值表示），随尿酸浓度增高、成骨能力增加光密度值逐渐减少(P＜0.05)(4) RT-PCR技术结果:各组都有11β-HSD1 mRNA表达，随尿酸浓度增高、成骨能力增加11β-HSD1 mRNA表达逐渐减少(P＜0.05)。结论:(1)尿酸能促进hBMSCs向成骨细胞增殖和分化，具有浓度依赖性和时间依赖性的特点(2)尿酸通过下调11β-HSD1 mRNA的表达，促进hBMSCs向成骨细胞分化。

目录

摘要

引言

第一章 材料与方法

1．1 实验试剂

1．2 实验仪器与耗材

1．3 液体配制

1．4 实验步骤

1．5 统计学分析

第二章 结果

2．1 hBMSCs的分离培养形态学观察

2．2 hBMSCs表面标志物的表达

2．3 诱导后的成骨细胞的细胞形态学观察

2．4 对诱导后的成骨细胞进行碱性磷酸酶(ALP)染色鉴定和茜素红染色鉴定

2．5 各成骨诱导培养基中钙结节数量统计比较

2．6 11β-HSD1免疫细胞化学染色结果

2．7 各培养基中11β-HSD1mRNA表达的结果(RT-PCR技术)

第三章 讨论

结论

参考文献

综述

攻读学位期间的研究工作

致谢

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