刺参酸性粘多糖对H22荷瘤小鼠肿瘤生长抑制作用及相关基因与蛋白表达的影响

摘要

目的:通过观察刺参酸性粘多糖（Stichopus japonicas acidic mucopolysaccharide，SJAMP）对肝癌H22荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用，从细胞分子生物学角度探讨其对H22肝癌细胞的增殖与凋亡作用，研究H22肝癌细胞增殖凋亡相关基因及蛋白的表达，为SJAMP的进一步开发利用提供科学依据。
　　方法:建立肝癌H22荷瘤小鼠模型，将50只昆明种小鼠随机分为5组，每组10只，雌雄各半，分别为阴性对照组（A组，生理盐水）、阳性对照组(B组，5-FU20mg/kg)、SJAMP低剂量组(C组，SJAMP6.25mg/kg)、 SJAMP中剂量组(D组，SJAMP12.5mg/kg)、SJAMP高剂量组（E组，SJAMP25mg/kg）。在建立肝癌模型的同时，各组均采用腹腔注射方式给药，每日一次，连续给药12天后处死。观察小鼠肿瘤发生情况，分别应用光学显微镜及电镜观察各实验组小鼠的瘤组织及细胞的病理学变化，用免疫组织化学方法检测H22肿瘤细胞内PCNA、P53、P21、C-myc、Cyclin D1、CDK4、pRb、E2F-1、Bcl-2、Bax蛋白的表达，用实时定量PCR(Real-time PCR，RT-PCR)方法检测H22肿瘤细胞中P53、P21、C-myc、Cyclin D1、CDK4、pRb、E2F-1、Bcl-2、Bax mRNA的表达。
　　结果:荷瘤小鼠经腹腔注射12天后，脱颈椎处死，无菌条件下剥取肿瘤组织，发现实验各组均有肿瘤组织出现，同阴性对照组相比，其它四组瘤量均有所减轻，且B、E两组瘤量与A组相比差异有统计学意义(P＜0.05);HE染色显示SJAMP各剂量组肿瘤细胞排列疏松，细胞质固缩，核质比减小;透射电镜观察发现，SJAMP各剂量组肿瘤细胞均出现不同程度的凋亡形态学特征，如出现细胞固缩、细胞质边集、凋亡小体等;免疫组织化学检测结果显示，与A组相比，SJAMP各剂量组小鼠与细胞增殖凋亡相关蛋白PCNA、P53、C-myc、Cyclin D1、CDK4、E2F-1、Bcl-2表达下降，且差别有统计学意义(P＜0.05)，P21、pRb、Bax蛋白的表达上升，且差别有统计学意义(P＜0.05);Real-time PCR结果显示，与A组相比，SJAMP各剂量组小鼠与细胞增殖凋亡相关基因P53、C-myc、CyclinD1、CDK4、E2F-1、Bcl-2表达下降，且差别有统计学意义(P＜0.05)，P21、pRb、Bax蛋白的表达上升，且差别有统计学意义(P＜0.05)。
　　结论:SJAMP能够抑制肝癌H22荷瘤小鼠肿瘤的生长。SJAMP可能通过调节肿瘤细胞内增殖细胞核蛋白PCNA、增殖相关基因p53、p21、C-myc mRNA及蛋白的表达，并通过调节Rb-E2F通路中Cyclin D1、CDK4、pRb、E2F-1 mRNA及蛋白的表达，作用于细胞周期，使小鼠H22肝癌细胞发生细胞周期阻滞，抑制肿瘤细胞增殖;SJAMP也可能能通过调节肿瘤细胞内凋亡相关基因Bax、Bcl-2mRNA及蛋白的表达，促进肿瘤细胞发生凋亡，从而达到抑制H22荷瘤小鼠肿瘤生长的作用。