不同温度下大鼠睾丸支持细胞胶质细胞源性神经生长因子的表达

摘要

目的通过观察不同温度条件下体外大鼠睾丸支持细胞GDNF表达特点，探讨高温致不育的机制方法采用组合酶消化法和选择性贴壁法分离雄性Wistar大鼠睾丸支持细胞（Sertoli cell，SC），将分离的SC分别置于不同温度进行体外培养，观察其贴壁、形态学变化，FASL免疫组化鉴定。实验分为对照组(35℃)、实验组(36℃、37℃、38℃、39℃)。CCK-8法检测SC增殖情况，HE染色观察细胞形态及结构，RT-PCR、免疫荧光及Western Blotting检测细胞GDNF的表达。
　　结果本实验条件下，体外分离培养SC纯度=(95.30±2.15)％(n=10)，CCK-8实验结果显示，36℃时细胞增殖率最高(P＜0.01），＞36℃时，随着温度的提高，增殖率逐渐降低，39℃对细胞增殖具有明显抑制作用(P＜0.01);免疫荧光结果显示，GDNF表达于支持细胞胞质，36℃时荧光最强，RT-PCR及Western Blotting法检测结果显示，高于36℃时，GDNF mRNA及蛋白的表达随着温度的增加而降低，36℃、37℃、38℃、39℃四组与对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　结论不同温度条件下，体外培养SC的增殖能力和GDNF表达明显不同。＞36℃时，随着温度的提高，增殖能力受到抑制，GDNF表达水平显著降低。本研究结果证实，高温条件下大鼠睾丸支持细胞正常功能受到抑制损害，并可能导致睾丸生精环境的破坏，而影响生精功能。